[发明专利]一种冬虫夏草与蛹虫草原生质体的融合方法

摘要

本发明提供了一种冬虫夏草和蛹虫草原生质体的融合方法，其特征是将冬虫夏草和蛹虫草菌丝细胞酶解制备原生质体，以冬虫夏草原生质体热灭活、以蛹虫草原生质体紫外灭活作为标记，采用PEG介导的化学融合方法，将冬虫夏草和蛹虫草原生质体融合，并通过菌落形态、颉颃试验、RAPD（随机扩增片段多态性）综合验证获得融合株。本发明能有效地将冬虫夏草和蛹虫草原生质体融合获得可为冬虫夏草的人工替代品的新菌株,为原生质体融合选育目的菌株提供了一种有效方法。

主权项

一种冬虫夏草和蛹虫草原生质体的融合方法，其特征在于将冬虫夏草和蛹虫草的菌丝体经酶解制备纯化后的原生质体，以冬虫夏草原生质体热灭活、以蛹虫草原生质体紫外灭活作为标记，采用PEG介导的化学融合方法，将冬虫夏草和蛹虫草原生质体融合，并通过菌落形态、颉颃试验、RAPD（随机扩增片段多态性）综合验证得融合株；所述的酶解液是冬虫夏草菌丝体酶解液：以0.6mol/L KCL为渗透压稳定剂，配制1ml 2% 溶壁酶（质量体积比）与1.00%蜗牛酶为混合酶解液；蛹虫草的菌丝体酶解液：以0.6mol/L 蔗糖为渗透压稳定剂，配制1ml 2.00 %溶壁酶与1.0%纤维素酶为混合酶解液；所述冬虫夏草和蛹虫草原生质体融合：分别将纯化后冬虫夏草和蛹虫草原生质体悬浮于0.6mol/L KCl渗透压稳定剂中，调节浓度至105个/ml，按照原生质体悬液体积比1:1混合，3000转/分钟离心10分钟弃上清，0.6mol/L KCl渗透压稳定剂重悬沉淀后逐滴加入等体积30%（质量体积比）PEG6000与50 mmol/L Ca2+混合溶液，35℃水浴融合20分钟。