[发明专利]2,4-二氯苯氧乙酸残留快速检测试纸条

摘要

本发明涉及一种检测除草剂的器具，特别是涉及一种2,4‑二氯苯氧乙酸残留快速检测试纸条。本发明2,4‑二氯苯氧乙酸残留快速检测试纸条含有底层为支撑层，中间层吸附层固定在支撑层上，外层保护层固定在吸附层上，吸附层从测试样品端依次为纤维层，吸附偶联2,4‑二氯苯氧乙酸的金标载体蛋白Xi纤维层，纤维素膜层，手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上有用2,4‑二氯苯氧乙酸的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“||”。该快速检测试纸条，特异性强，敏感性高，操作简便快速；检测结果显示形象，直观，准确，成本低，投资少，不需专用仪器设备及专业人员，容易推广实施。

主权项

一种2,4‑二氯苯氧乙酸残留快速检测试纸条，含有底层为支撑层，中间层吸附层固定在支撑层上，外层保护层固定在吸附层上，其特征是：吸附层从测试端依次为纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联2,4‑二氯苯氧乙酸的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“||”；金标抗体纤维层用吸附2,4‑二氯苯氧乙酸的金标抗体玻璃棉，2,4‑二氯苯氧乙酸金标抗体为胶体金标记的2,4‑二氯苯氧乙酸的单克隆抗体或多克隆抗体，偶联2,4‑二氯苯氧乙酸的载体蛋白溶液为2,4‑二氯苯氧乙酸与载体蛋白偶联的复合溶液；抗2,4‑ 二氯苯氧乙酸单克隆抗体W1的制备以20μg/只～50μg/只的偶联2,4‑二氯苯氧乙酸的载体蛋白免疫BALB/c系小鼠，采用背部皮下多点注射，共免疫四次，每次间隔15～30天；第四次加强免疫后3～4天，将免疫小鼠眼球放血，拉颈致死，于75% 酒精浸泡5～10min，无菌取其脾细胞；剪碎并经100 目尼龙网过滤，1000r/min离心10min，收集脾细胞；将1×108的脾细胞与2～5×107的NSO 浆细胞瘤细胞混合，1000r/min离心10 min 弃上清，细胞沉淀于37℃的水溶中缓缓加入0.7～lml的40～50% pH 8.5～9.0的PEG4000作用1min，然后缓慢加入无血清1640培养基15ml，以终止PEG的作用，37℃水浴5～l0min，1000r/min离心l0min 弃上清，将细胞沉淀重悬于HAT选择培养基中，并以100μL～200μL/孔加入96孔培养板，置于37℃ 5% CO2培养箱中培养；培养7～10天后，以5～10μg/ml的偶联2,4‑二氯苯氧乙酸的载体蛋白包被酶标板，酶标板96孔/块，以酶联免疫吸附试验( ELISA) 检测杂交瘤的培养上清，挑取OD492=0.8以上的强性细胞克隆，进行连续三次的有限稀释法克隆化，所生产的杂交瘤细胞染色体数为92～98，其分泌的单克隆抗体Wl特异地与2,4‑二氯苯氧乙酸反应，而不与其它蛋白发生交叉反应，亲和力常数达1010，重链亚型为IgG1，针对2,4‑ 二氯苯氧乙酸特异抗原决定簇的单克隆抗体Wl，用于制备金标抗体；2,4‑二氯苯氧乙酸金标抗体W1和金标抗体玻璃棉的制备以柠檬酸钠还原法制备金溶胶，即在50～l00ml沸腾0.01～0.05%氯金酸水溶液中加入2～4ml的0.5～2%柠檬酸三钠溶液，获得直径15nm左右的胶体金；以0.1mol/L的K2CO3调胶体金pH至8.5～9.5，置于以1:1000～1300的标记比将待标记的2,4‑二氯苯氧乙酸单克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记l0min后，加20%PEG10000至终浓度0.05%，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化金标抗体蛋白混合物后，用丙烯葡聚糖S‑400柱层析，分离纯化金标蛋白，获得2,4‑二氯苯氧乙酸胶体金标记抗体；将1：(100～500)稀释的胶体金标记抗体吸附于精制玻璃棉中，4℃低温真空干燥，制备2,4‑二氯苯氧乙酸金标抗体棉。