[发明专利]坛紫菜中红藻糖苷和异红藻糖苷含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种利用液质联用方法检测坛紫菜中红藻糖苷和异红藻糖苷含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：样品处理、液相色谱和质谱检测条件设置、标准曲线绘制、测定待测样品、结果计算等步骤。与现有技术相比，本发明用于坛紫菜中红藻糖苷和异红藻糖苷的定量检测，样品处理和检测方法简单、快速，准确度和灵敏度高，重复性好；红藻糖苷和异红藻糖苷的标准溶液在0.08μg/mL～91.9μg/mL之间线性良好。

主权项

一种利用液质联用方法检测坛紫菜中红藻糖苷和异红藻糖苷含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（一）、样品处理过程：取1g坛紫菜粉和4～6ml纯度为65～75wt%的乙醇于反应瓶中，用铝箔纸封口；置于水浴摇床，在110～130转/分、65～75℃下水浴5～7小时，取出；过滤得到的固相用热乙醇（60～70℃）冲洗2～4次，每次10～20mL；过滤所得冲洗液，过滤得到的液相在4500～5500转/分下离心8～12分钟，取液相置于烧瓶中，旋转蒸干后，用0.4～06ml乙腈和0.4～06ml水溶解，得到的溶液用0.40～0.50μm滤膜过滤，得到的液相部分即为待测样品。（二）、检测：液相色谱和质谱条件：（1）所用仪器：TSQ Quantum Access液相色谱‑三重四极杆质谱联用分析系统；（2）液相条件：固定相为Waters XBridgeTM Amide柱（100mm×3.0mm,3.5μm）；流动相为体积比为90：10的乙腈‑0.1%乙酸铵水溶液等度洗脱；进样量10μL，柱温40℃；（3）质谱条件：采用电喷雾电离源负离子电离模式，喷雾电压2.5KV，鞘气流量25L/min，辅助气流量5L/min，离子传输毛细管温度350℃，扫描采用选择反应监测SRM模式，母离子为[M‑H]‑离子m/z277，子离子m/z119和89，碰撞能量分别为20eV和21eV，采集时间均为0.2s，碰撞气采用氩气，碰撞气压力1.5mTorr；Q1和Q3分辨率均设定为半峰宽0.7Da；（三）、绘制标准曲线绘制；（四）、按步骤（二）的条件测定待测样品，记录待测样品的峰面积，和峰面积‑浓度标准曲线比对；（五）、结果计算：红藻糖苷和异红藻糖苷的含量X=C*V*n/m，式中：X—样品中红藻糖苷和异红藻糖苷的含量，单位μg/mg;C—将液质方法检测到的峰面积代入相应的标准曲线，即可计算得到测液中红藻糖苷和异红藻糖苷浓度，单位为μg/mL；V—待测液体积，单位为mL；n—待测液稀释倍数m—样品质量，单位为mg。