[发明专利]一种司牛角组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种司牛角组织培养的方法，包括如下步骤：培养基的配制、外植体的选取与消毒、种子无菌萌发、不定芽诱导、不定芽增值、不定芽生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基选用MS培养基，蔗糖用量为20～40g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，培养基pH分装前调整为5.7～5.8；种子萌发培养基为MS或1/2MS培养基；不定芽诱导培养基为MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；生根培养基为MS+IBA0～1.0mg/L或1/2MS+IBA0～1.0mg/L。本发明的优点：建立的司牛角组培快繁技术体系增殖系数3～3.5，生根率95％以上，移栽成活率100％，组培苗健壮均匀，适合优良司牛角种苗规模化生产。

主权项

一种司牛角组织培养的方法，其特征在于：该方法包括以下几个步骤：1)、外植体的选取及处理：选取司牛角种子作为起始材料，将收集到的司牛角种子经过浸种2h后，选择沉在容器底部的种子作为外植体，作为组培用外植体；2）、种子萌发：在超净工作台上，将经过表面消毒的司牛角种子转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去外植体表面水分，接种于种子萌发培养基MS或1/2MS培养基中进行种子萌发，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；3）不定芽诱导：种子萌发获得的干净、成活材料在无菌工作台上接种于不定芽诱导培养基MS+6‑BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；4）不定芽增殖：在无菌工作台上，将不定芽诱导培养获得的1～2cm高的不定芽2～3个一丛，利用无菌的解剖刀将丛芽基部造成伤口，接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6‑BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；5）、不定芽生根诱导：将高生长到3～5cm的丛生不定芽3～5个一丛，接入生根培养基中进行不定根的诱导,生根培养基为MS+IBA0～1.0mg/L或1/2MS+IBA0～1.0mg/L或MS+NAA0～1.0mg/L或1/2MS+NAA0～1.0mg/，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1，生根率95％以上；6）、组培苗驯化及移栽：丛生不定芽基部长出3～5条2～3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，将司牛角生根植株整丛小心从培养瓶中取出，用自来水洗净组培苗基部的培养基,然后在通风阴凉处晾干至组培苗表面稍有皱缩,将司牛角组培苗，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养。