[发明专利]一种微生物固定化方法

摘要

本发明公开了一种微生物固定化方法，包括乳酸菌的固定化和Nisin的连续生产工艺。首先菌体在反应器内生长并吸附于载体材料上；然后放出游离菌体后加入新鲜培养液，结合反应器的高径比，控制流速使发酵液刚好到达反应器底部流出时产物Nisin量达到最高；最后产物从底部流入产物收集罐。同时使用的载体是可重复使用的聚氨酯泡沫载体材料，整个过程操作简单，由于移除了影响乳酸菌生长和生产的两个限制性因素-营养成分减低和产物引起的低pH-可实现乳酸菌在较高的Nisin产率下连续化生产。

主权项

一种微生物固定化方法，具体包括以下步骤： （1）载体材料预处理：制备阳离子型聚氨酯泡沫载体，将孔径为30‑60PPI的聚氨酯泡沫载体材料置于3%‑10%盐酸处理15‑24小时； （2）反应器和材料灭菌：将步骤（1）的阳离子型聚氨酯泡沫载体填充到反应器中，进行直接在线灭菌；该反应器的底部设置有微孔介质； （3）接种：加入乳酸菌培养液，并按5‑10%的接种量接入乳酸菌；其中乳酸菌培养基的配比为：酵母膏1.5%，蛋白胨1.5%，磷酸二氢钾2%，蔗糖1.5%，玉米浆0.3%，半胱氨酸0.023%，无碘精盐0.15%，MgSO4·7H2O0.015%，pH为7.2； （4）固定化：采用吸附法，将接种过的反应器于25‑35℃保温6‑12小时，乳酸菌大量生长并吸附在聚氨酯泡沫表面； （5）连续发酵：收集反应器中的发酵液和游离菌体；流加新鲜培养液，控制流速0.1‑2rpm，使发酵产品稳定直接流出，由装有pH=2的盐酸缓冲液的容器接收。