[发明专利]一种博来霉素族衍生物的分离和纯化方法

摘要

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种从黄绿链霉重组工程菌SB9026（保藏号CCTCC M2011292）的发酵液中分离和纯化博来霉素族衍生物6’‑脱羟基‑BLM S的方法。该方法包括沉淀分离前处理、D‑113和Diaion HP‑20树脂吸附洗提、Silica Flash柱等梯度洗提、脱铜精制等步骤。该方法简化和减少了分离纯化步骤，降低了生产成本，增加了回收率。本发明的博来霉素族衍生物其化学结构通式如说明书中所示。

主权项

一种博来霉素族衍生物的分离和纯化方法，其特征是，具体步骤为：(1)收集黄绿链霉重组工程菌SB9026经过发酵培养后得到的发酵液，加入十二水合硫酸铝钾，每升发酵液中加入十二水合硫酸铝钾0.4g‑0.6g，充分搅拌后，静置25‑30分钟后再加入硅藻土，每升发酵液中加入硅藻土5g‑6g，搅拌后进行固液分离，得到pH值为6‑8的发酵上清液；所述黄绿链霉重组工程菌SB9026的保藏号为CCTCC M 2011292；(2)向步骤(1)得到的发酵上清液中加入D113型弱酸性阳离子交换树脂富集吸附1‑2小时，每升发酵上清液中加入D113型弱酸性阳离子交换树脂90ml‑110ml；将吸附后的D113型弱酸性阳离子交换树脂装入分离柱I并用去离子水冲洗至洗提液无色，然后用1.5‑2.5倍于分离柱I柱体积的质量浓度为0.4％‑0.5％的NaCl溶液冲洗树脂柱，最后用质量浓度为10％‑12％的NaCl溶液进行洗提，收集洗提液；(3)将步骤(2)得到的洗提液与450ml‑550ml Diaion HP‑20树脂混合并在20‑25℃的温度下震荡25min‑35min进行吸附，将Diaion HP‑20树脂装入分离柱II后4.5‑5.5倍于分离柱II柱体积的去离子水冲洗并排干残余水，然后用0.5‑1.5倍分离柱体积的纯甲醇进行洗提，收集的甲醇洗提液浓缩蒸干后得到粗提物；(4)将步骤(3)得到的粗提物用质量浓度为4％‑5％的甲醇去离子水溶液溶解，离心去除不溶物后所得的上清液载入Silica Flash柱，并用4％‑5％的甲醇去离子水溶液进行等梯度洗提，直至洗提液中不含目标产物6’‑脱羟基‑BLM S为止，收集洗提液合并浓缩后得到浅蓝色铜离子复合物粗品；(5)将步骤(4)得到的铜离子复合物粗品脱铜精制：每1克铜离子复合物粗品用15ml‑20ml甲醇溶解，得复合物溶液；每0.2g二乙基二硫代氨基甲酸钠用2ml‑3ml甲醇溶解，得二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液；将复合物溶液与二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液充分混合，得混合溶液，使得混合溶液中铜离子复合物粗品与二乙基二硫代氨基甲酸钠的质量比为1:0.2‑0.3；将混合溶液离心得到上清液，将上清液与丙酮按1:4‑5的体积比充分混合，离心后去上清液，沉淀物用丙酮淋洗2‑3次后在62℃‑68℃下常压恒温干燥，得到不含铜离子的粗纯化产物；每1克的粗纯化产物用50ml‑60ml去离子水充分溶解后，加入丙酮直至丙酮质量浓度达到65％‑70％，在4℃‑5℃的环境下静置18‑20小时后进行离心处理，将离心处理后所得的上清液浓缩蒸干，得到不含铜离子的纯化6’‑脱羟基‑BLM S。