[发明专利]一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法在审
申请号: | 201310015275.8 | 申请日: | 2013-01-16 |
公开(公告)号: | CN103926207A | 公开(公告)日: | 2014-07-16 |
发明(设计)人: | 高旭哲;张玥;刘畅;战辛 | 申请(专利权)人: | 辽宁成大生物股份有限公司 |
主分类号: | G01N21/33 | 分类号: | G01N21/33 |
代理公司: | 沈阳亚泰专利商标代理有限公司 21107 | 代理人: | 韩辉 |
地址: | 110179 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法,其特点是:A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化;B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分;C)用Bindingbuffer清洗柱;使纯化样品进入柱内,连续接收流出组分;D)使用Bindingbuffer清洗柱,连续接收流出组分;E)使用Elutionbuffer洗脱柱,连续接收流出组分;F)每个收集管中取50μl分别加入384孔板中。本方法利用酶标仪,对每个洗脱组分在280nm波长下检测其吸收值,进而检测其IgG含量,并得到最终纯化组分曲线,可替代自动检测器描述整个过程纯化。 | ||
搜索关键词: | 一种 纯化 抗体 制备 曲线 方法 | ||
【主权项】:
一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法,其特征在于有以下步骤:A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化,选择纯化柱的体积是1ml;B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分,每个管内收集0.2ml流出组分;C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱,清洗5个柱体积(取最后1个柱体积的流出组分作为实验空白);D)使用注射器注射1ml待纯化样品进入柱内,连续接收流出组分;C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱,连续接收流出组分;E)使用3个柱体积的Elution buffer 洗脱柱,连续接收流出组分;F)每个收集管中取50μl分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡);设定平衡柱的流出组分为空白,同时设定酶标仪波长280nm。
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