[发明专利]烟草及烟草制品中黄曲霉毒素的酶联免疫测定方法

摘要

本发明涉及一种烟草及烟草制品中黄曲霉毒素的酶联免疫测定方法，适用于烟叶样品和烟丝样品中黄曲霉毒素的准确测定。本发明方法包括样品的前处理，样品中黄曲霉毒素的提取，标准工作溶液的配制，检测方法的优化，酶联免疫测定方法的建立等步骤，该方法能快速、准确检测烟草及烟草制品中黄曲霉毒素的含量，实验操作简单，非特异性吸附少，仪器设备投资少，测定成本低廉测定结果准确可靠。

主权项

一种烟草及烟草制品中黄曲霉毒素的酶联免疫测定方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：（1）样品前处理：烟叶样品或烟丝在40 ℃下烘干，在粉碎机上粉碎，过40目筛；（2）样品中黄曲霉毒素的提取：称取5 g经前处理的烟末样品和0.5 g氯化钠置于100 mL具塞锥形烧瓶中，加入20 mL的80%的甲醇水溶液，盖好盖子置于振荡器上高速振荡5分钟，静置3分钟使样品沉淀，用玻璃纤维滤纸过滤10 mL萃取液，收集滤液到干净容器中，取5 mL萃取液，加入20 mL水稀释，混匀后待测；（3）标准工作液的配制：用16%的甲醇水溶液配制不同浓度的黄曲霉毒素标准工作溶液；（4）酶联免疫法测定：在96孔板表面固定黄曲霉毒素‑牛血清白蛋白（AFT‑BSA）偶联物，加入标准工作溶液或检测样品，随后立即加入表面抗体修饰、辣根酶包埋的脂质体溶液，反应20分钟后清除微孔板内溶液并洗涤，加入含有1%十二烷基磺酸钠（SDS）的四甲基联苯胺（TMB）底物，避光反应20分钟，加入终止液，在450nm处检测紫外吸收。