[发明专利]一种分离乳酸杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种分离乳酸杆菌的方法，其步骤是：A、将MRS固体培养基调节pH后装入生理盐水瓶，充入二氧化碳使培养基中氧气消耗殆尽，密封，灭菌，45度倾斜放置，培养基形成斜面，自然冷却；B、将待分离的样品用无菌双蒸水混合，涡旋后静置；C、移取上清进行稀释，分别取10-3、10-4、10-5三个稀释，分别用注射器注入到生理盐水瓶的斜面上，转动生理盐水瓶，使样品均匀分布在生理盐水瓶中的斜面培养基上；D、倒置于生化培养箱中培养，乳酸杆菌将在培养基表面被分离出来。方法易行，操作简便，该方法可以用于实验室乳酸杆菌的分离，同时适合在样品采集地点进行乳酸杆菌的野外分离，并显著减少工作量。

主权项

一种分离乳酸杆菌的方法，其步骤是：将配制的MRS固体培养基调节pH6.0‑6.6后，装入100‑150毫升培养基于250毫升生理盐水瓶中，充入二氧化碳气体至培养基中氧气消耗殆尽，将一细线的一端置于瓶内，另一端置于瓶外，用橡胶盖塞住瓶口，然后用封口膜密封，置于灭菌锅115 ℃灭菌13‑18分钟，拔掉细线，以45度角倾斜放置，使培养基形成斜面，自然冷却到培养基凝固；将待分离的样品用无菌双蒸水以体积比1:10混合，涡旋一分钟后静置3‑6分钟；移取上清1毫升进行10倍倍比稀释，然后分别取10‑3、10‑4、10‑5三个稀释度各200微升样品，用注射器注入A步中所制备的装有固体培养基的250毫升生理盐水瓶中，用蜡密封好注射过程中注射器留在生理盐水瓶上橡胶塞的注射孔，转动生理盐水瓶，使样品均匀分布在生理盐水瓶中培养基的斜面上；将生理盐水瓶倒置于生化培养箱中29‑31℃恒温培养46‑50小时，乳酸杆菌在生理盐水瓶的斜面培养基上被分离出来；所述MRS固体培养基为：组成成份        重量份牛肉蛋白粉    8‑12鱼肉汁        8‑12酵母浸出汁粉       3‑7葡萄糖    18‑22醋酸钠    3‑7柠檬酸二铵       1‑3吐温80       0.08‑ 0.2硫酸镁    0.48‑ 0.68硫酸锰           0.18‑ 0.38琼脂粉    13‑17蒸溜水    800‑1200。