[发明专利]一种研究厚壳贻贝胚胎和幼虫神经发育的方法无效
| 申请号： | 201310008239.9 | 申请日： | 2013-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN103076457A | 公开（公告）日： | 2013-05-01 |
| 发明（设计）人： | 杨金龙;李树恒;梁箫;李家乐 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/533;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 巫蓓丽 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种研究厚壳贻贝胚胎和幼虫神经发育的方法：a）将胚胎和幼虫置入质量浓度为0.1-8%的MgCl2溶液中处理，用多聚甲醛固定幼虫；b）取出处理后的幼虫，洗涤后用质量浓度0.1-15%乙二胺四乙酸静置脱钙，然后用PBS洗涤后加入封闭液；c）用浓度1:200-1:1000的5羟色胺抗体或FMRF酰胺类抗体和α微管蛋白抗体结合标记厚壳贻贝胚胎和幼虫，4℃孵育1-8天，再用PBST洗涤后分别加入含有浓度为1:800-1:1200二抗的PBS中，4℃孵育4-12小时。使用该方法可获得清晰的荧光信号图谱，清楚观测到胚胎及幼虫阶段的神经发育过程，为揭示厚壳贻贝浮游幼虫的附着变态机制奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 研究 贻贝 胚胎 幼虫 神经 发育 方法 | ||
【主权项】：
一种研究厚壳贻贝胚胎和幼虫神经发育的方法，其特征在于，它包括以下步骤：a）将厚壳贻贝的胚胎和幼虫置入质量浓度为0.1‑8%的MgCl2溶液中处理20‑30 min，用多聚甲醛将幼虫固定在PBS缓冲液中；b）取出步骤a）处理后的幼虫，洗涤后用质量浓度0.1‑15%的乙二胺四乙酸静置脱钙，然后将胚胎或幼虫样品用PBS缓冲液洗涤后加入封闭液；c）用浓度1:200‑1:1000的5羟色胺抗体或浓度1:200‑1:1000的FMRF酰胺类抗体和浓度1:200‑1:1000的α微管蛋白抗体结合标记步骤b）的厚壳贻贝胚胎和幼虫，4℃下孵育1‑8天，再用PBST洗涤后分别加入含有浓度为1:800‑1:1200二抗的PBS溶液中，4℃下孵育4‑12小时。
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