[发明专利]一种同时测定尿液中1-OHP、3-OHB[a]P和3-OHB[a]A含量的方法

摘要

本发明公开了一种同时测定尿液中1-OHP、3-OHB[a]P和3-OHB[a]A含量的方法。本发明依次采用β-葡糖甘酸酶酶解样品、固相萃取纯化、真空旋转蒸发仪浓缩样品、液相色谱-串联质谱仪进行测定，可快速、准确、同时检测出、尿液中1-羟基芘（1-OHP），3-羟基苯并[a]芘（3-OHB[a]P）和3-羟基苯并[a]蒽（3-OHB[a]A）的含量水平。本发明采用氘代标准品作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差、串联质谱法更好的提高了方法的选择性与准确性、选取了基质配标的方法，比纯水配标准品法有更好的准确性，能够消除基质效应的干扰。通过色谱柱以及梯度洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了色谱分析的时间。

主权项

一种同时测定尿液中1‑OHP、3‑OHB[a]P和3‑OHB[a]A含量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）酶解尿液样本：取尿液样本，置于室温下解冻，调节尿液pH，依次加入醋酸缓冲液、β‑葡糖甘酸酶/芳基硫酸酯酶，水浴振荡酶解过夜；（2）固相萃取纯化：选取C18固相萃取柱，上样前经甲醇和水活化，将酶解后的尿液样本全部上样，用水和甲醇/水淋洗，吹干后，用甲醇洗提，过滤后即为样品待测液；（3）混合空白尿液和标准工作液的配制：取三个非吸烟者的尿液混合均匀作空白尿液，配制不同浓度的1‑OHP,3‑OHB[a]P和3‑OHB[a]A标准工作溶液；（4）液相色谱‑串联质谱（LC‑MS/MS）测定：分别吸取空白尿液和配制好的不同浓度的1‑OHP、3‑OHB[a]P和3‑OHB[a]A标准工作溶液，注入LC‑MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中1‑OHP、3‑OHB[a]P和3‑OHB[a]A含量。