[发明专利]一种提高石斛生物活性多糖溶出率的生物酶辅助提取方法

摘要

本发明公开了一种提高石斛生物活性多糖溶出率的生物酶辅助提取方法，采用最适pH接近中性的多种生物酶复配分步辅助提取石斛多糖，先选用纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶分解石斛细胞壁的纤维素、半纤维素及果胶质等物质，再用蛋白酶降解细胞中的蛋白和多肽，使多糖充分溶于水中，终产物经HPSEC分离和视差折光检测器检测以及苯酚-硫酸法测定还原性糖含量。本发明方法有效提高石斛生理活性多糖的溶出率，明显降低蛋白质含量，产品质量和产量都有了大幅提高，同时生产工艺中无酸碱溶液、有毒有机试剂的使用和排放及微波辐射发生，更为节能、环保。

主权项

一种提高石斛生物活性多糖溶出率的生物酶辅助提取方法，其特征在于，该方法在中性pH条件下采用多种生物酶复配分步提纯药用石斛水溶性多糖，其具体步骤如下：（1）将干燥的石斛粉碎后过40‑50目筛，用95%食用乙醇索氏回流脱脂1‑2h；（2）将上述脱脂产物过滤，烘干成干粉，按质量分数取4‑6份石斛干粉浸泡于100份的蒸馏水中并调节pH值至7.0，然后水浴升温至50‑55℃，再分别添加相当于石斛干粉质量1.0‑2.0%的中性纤维素酶、1.0‑2.0%的中性木聚糖酶和1.0‑2.0%的果胶酶，酶解2‑3h，协同分解破坏细胞组织中的纤维素、半纤维素和果胶质；（3）继续向50‑55℃、pH值7.0的浸泡液中加入相当于石斛干粉质量1.0‑2.0%的中性蛋白酶，酶解2‑3h，分解破坏细胞组织中的各类蛋白质和多肽；（4）将浸泡液加热至90‑95℃，并保温20‑30min，使加入的酶制剂变性失活，4000‑5000rpm离心30min,除去变性蛋白及多肽，上清液即为石斛多糖提取液；（5）将石斛多糖提取液经旋转蒸发仪真空浓缩至适当体积，然后再加入4‑5倍浓缩液体积的无水乙醇，在4‑6℃中静置22‑24h沉淀多糖；（6）将乙醇沉淀物抽滤后得到固形物，并用75%的食用乙醇液进行洗涤；（7）将洗涤后的固形物在50℃烘干至恒重，然后粉碎，即获得石斛粗多糖；（8）利用高效体积排阻色谱(HPSEC)仪和视差折光检测器分离石斛粗多糖为不同分子量范围的分离产物，同时利用苯酚‑硫酸法测定不同分子量范围分离产物的还原性糖含量；另外参照2010药典中《铁皮石斛》中规定方法测定多糖分解产物中的甘露糖和葡萄糖比值。