[发明专利]整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型及其建立与应用

摘要

本发明涉及一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型及其建立与应用，所述裸鼠模型通过采用基因重组技术和慢病毒感染将萤火虫荧光素酶基因引入人肺腺癌H1650细胞株中，通过亚克隆筛选获得稳定表达荧光素酶的肿瘤克隆细胞株，然后采用重组的H1650细胞接种于免疫缺陷裸鼠构建而成。本发明与传统的肿瘤模型药物效果检测方法相比，观察更加直观方便，并且可进行活体观察而不损伤动物，结果更加可靠，具有良好的应用前景。

主权项

一种整体可视化人肺腺癌H1650细胞系的建立方法，包括：(1)设计萤火虫荧光素酶基因特异性引物；使用该特异性引物PCR扩增萤火虫荧光素酶基因并克隆至PCR‑Blunt克隆载体中并转化大肠杆菌感受态细胞，质粒抽提后运用基因重组方法将荧光素酶目的基因片段插入慢病毒真核表达载体PRRL‑CMV空质粒中并转化大肠杆菌感受态细胞，质粒抽提后进行双酶切和测序证实构建的表达载体的正确性；其中，特异性引物为：上游引物：CCTTCTAGAATGGAAGATGCCAAAAACATTAAG；下游引物：CCTGTCGACTTACACGGCGATCTTGCCGCCCTTC；(2)大肠杆菌扩增荧光素酶慢病毒载体和慢病毒包装质粒，并纯化测定浓度；将荧光素酶慢病毒表达载体与慢病毒包装质粒混合后，用转染试剂共转染293T细胞，以产生含有萤火虫荧光素酶慢病毒颗粒的上清，确定慢病毒颗粒的滴度；以人肺腺癌H1650为母细胞，用上述病毒上清进行感染；进行细胞亚克隆筛选，检测单克隆细胞内的荧光表达情况，筛选出稳定表达荧光素酶报告基因的重组细胞株并进行扩大培养，得到稳定表达荧光素酶的肺腺癌细胞系。