[发明专利]整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型及其建立与应用

权利要求书

1.一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型，其特征在于：所述裸鼠模型通过采用基因重组技术和慢病毒感染将萤火虫荧光素酶基因引入人肺腺癌H1650细胞株中，通过亚克隆筛选获得稳定表达荧光素酶的肿瘤克隆细胞株，然后采用重组的H1650细胞接种于免疫缺陷裸鼠构建而成。

2.一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，包括：

（1）设计萤火虫荧光素酶基因特异性引物；使用该特异性引物PCR扩增萤火虫荧光素酶基因并克隆至PCR-Blunt克隆载体中并转化大肠杆菌感受态细胞，质粒抽提后运用基因重组方法将荧光素酶目的基因片段插入慢病毒真核表达载体PRRL-CMV空质粒中并转化大肠杆菌感受态细胞，质粒抽提后进行双酶切和测序证实构建的表达载体的正确性；

（2）大肠杆菌扩增荧光素酶慢病毒载体和慢病毒包装质粒，并纯化测定浓度；将荧光素酶慢病毒表达载体与慢病毒包装质粒混合后，用转染试剂共转染293T细胞，以产生含有萤火虫荧光素酶慢病毒颗粒的上清，确定慢病毒颗粒的滴度；以人肺腺癌H1650为母细胞，用上述病毒上清进行感染；进行细胞亚克隆筛选，检测单克隆细胞内的荧光表达情况，筛选出稳定表达荧光素酶报告基因的重组细胞株并进行扩大培养；

（3）将得到的重组人肺腺癌细胞经消化后重悬于氯化钠溶液中，在裸鼠皮下接种该重组人肺腺癌细胞，监测细胞皮下增殖情况，即得到整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型。

3.根据权利要求2所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述步骤（1）中的特异性引物为：

上游引物：CCTTCTAGAATGGAAGATGCCAAAAACATTAAG；

下游引物：CCTGTCGACTTACACGGCGATCTTGCCGCCCTTC；

基因重组方法为酶切和连接；其中，酶切具体为采用Xba I和Sal I双酶切。

4.根据权利要求2所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）中的荧光素酶慢病毒表达载体与慢病毒包装质粒的质量比为1:3、1:6或1:9。

5.根据权利要求2或4所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述慢病毒包装质粒包括第三代慢病毒复制所需要的三个基因：gag、pol和rev。

6.根据权利要求2所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）中的转染试剂为MV40转染试剂。

7.根据权利要求2所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）中通过ELISA法确定慢病毒颗粒的滴度；通过细胞有限稀释法进行细胞亚克隆筛选；通过荧光测定仪或活细胞成像仪检测单克隆细胞内的荧光表达情况。

8.根据权利要求2所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述步骤（3）中的氯化钠溶液质量百分比浓度为0.9%。

9.根据权利要求2所述的一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的建立方法，其特征在于：所述步骤（3）中通过游标卡尺测量和活体成像仪监测细胞皮下增殖情况。

10.一种如权利要求1所述的整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型的应用，其特征在于：所述裸鼠模型应用于观察肿瘤的生长情况和抗肿瘤药物的治疗效果。