[发明专利]狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域和森林繁育领域，特别是涉及狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法。其主要技术特征为：包括几个步骤：培养基的配制；外植体的选取与消毒；诱导培养；继代及生根培养；组培苗移栽与驯化。本发明的有益效果是：采用的叶片为外植体，取材方便、容易，仅用较少的试材，即可实现全年工厂化生产；生产周期短，从接种到组培苗移栽仅需53-65天，叶片诱导率可达93%，增殖倍数可达12-15倍，移栽生根率可达92%；提出了一种不用瓶内生根，而采用瓶外蘸根的方法，既节省了瓶内生根的时间，也降低了育苗成本；提出了一种冬季育苗时提高生根率的办法，提高了移栽成活率，使之达到95%，同时节省了育苗成本。

主权项

一种狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法，其特征为：包括以下几个步骤：（一）培养基的配制： 1）基本培养基：采用常规MS培养基配方配制，其中琼脂浓度为6.5‑7.5g/L，用白糖取代蔗糖，浓度为25‑30 g/L，调整基本培养基的pH值为5.5‑5.8；2）诱导培养基：向基本培养基中加入6‑BA即6‑苄氨基嘌呤，使之浓度为0.5‑1.5mg/ L；3）继代培养基：向基本培养基中加入6‑BA即6‑苄氨基嘌呤，使之浓度为1.5‑2.0 mg/L，NAA即萘乙酸，使之浓度为0.5‑1.0 mg/L及IBA即吲哚丁酸，使之浓度为1.0‑1.5mg/L；（二）外植体的选取与消毒：1）外植体的选取：选取狗枣猕猴桃成熟植株上的离体叶片作为外植体；2）外植体的消毒：将选取的叶片用清水冲洗1‑2小时，在超净工作台上用70%酒精消毒30s，然后用无菌水冲洗3遍，用0.1%升汞水溶液消毒2次，每次4分钟，然后用无菌水冲洗3‑5遍，取出用无菌滤纸吸干水分，备用；（三）诱导培养：将消毒好的叶片周缘切掉，然后在叶片表面割成网格状或将叶片切成1厘米见方的小块横放在诱导培养基中，在温度24℃±2℃，光照周期12‑14小时/d，光照强度2000lux±400 lux的无菌环境下培养25‑30天左右，诱导萌发出初代幼芽或丛芽；（四）继代及生根培养：将诱导出的初代幼芽或丛芽移植到继代培养基中，培养28‑35天分化形成12‑15倍、芽长至4‑6cm、已生根3‑5cm的组培苗；（五）组培苗移栽与驯化：将已生根的组培苗，在温室内开瓶炼苗2‑3天后，将基部的培养基去掉，用浓度1000ppm的ABT生根粉药液蘸根30s后移栽至细河沙：蛭石：珍珠岩=1：1：1的基质中，浇足水，保持60%‑90%的湿度至组培苗成苗，待40‑50天后，组培苗已经长出很多的毛细根系，长7‑10cm左右，转移至营养钵中继续生长，等待出圃。