[发明专利]狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法

权利要求书

1.一种狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法，其特征为：

包括以下几个步骤：

（一）培养基的配制：

 1）基本培养基：采用常规MS培养基配方配制，其中琼脂浓度为6.5-7.5g/L，用白糖取代蔗糖，浓度为25-30 g/L，调整基本培养基的pH值为5.5-5.8；

2）诱导培养基：向基本培养基中加入6-BA即6-苄氨基嘌呤，使之浓度为0.5-1.5mg/ L；

3）继代培养基：向基本培养基中加入6-BA即6-苄氨基嘌呤，使之浓度为1.5-2.0 mg/L，NAA即萘乙酸，使之浓度为0.5-1.0 mg/L及IBA即吲哚丁酸，使之浓度为1.0-1.5mg/L；

（二）外植体的选取与消毒：

1）外植体的选取：选取狗枣猕猴桃成熟植株上的离体叶片作为外植体；

2）外植体的消毒：将选取的叶片用清水冲洗1-2小时，在超净工作台上用70%酒精消毒30s，然后用无菌水冲洗3遍，用0.1%升汞水溶液消毒2次，每次4分钟，然后用无菌水冲洗3-5遍，取出用无菌滤纸吸干水分，备用；

（三）诱导培养：将消毒好的叶片周缘切掉，然后在叶片表面割成网格状或将叶片切成1厘米见方的小块横放在诱导培养基中，在温度24℃±2℃，光照周期12-14小时/d，光照强度2000lux±400 lux的无菌环境下培养25-30天左右，诱导萌发出初代幼芽或丛芽；

（四）继代及生根培养：将诱导出的初代幼芽或丛芽移植到继代培养基中，培养28-35天分化形成12-15倍、芽长至4-6cm、已生根3-5cm的组培苗；

（五）组培苗移栽与驯化：将已生根的组培苗，在温室内开瓶炼苗2-3天后，将基部的培养基去掉，用浓度1000ppm的ABT生根粉药液蘸根30s后移栽至细河沙：蛭石：珍珠岩=1：1：1的基质中，浇足水，保持60%-90%的湿度至组培苗成苗，待40-50天后，组培苗已经长出很多的毛细根系，长7-10cm左右，转移至营养钵中继续生长，等待出圃。

2.根据权利要求1所述的一种狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法，其特征为：

（一）培养基的配制：

 1）基本培养基：采用常规MS培养基配方配制，其中琼脂浓度为7g/L，用白糖取代蔗糖，浓度为28 g/L，调整基本培养基的pH值为5.8；

2）诱导培养基：向基本培养基中加入6-BA即6-苄氨基嘌呤，使之浓度为1.0mg/ L； 

3）继代培养基：向基本培养基中加入6-BA即6-苄氨基嘌呤，使之浓度为1.8mg/L，NAA即萘乙酸，使之浓度为0.8 mg/L及IBA即吲哚丁酸，使之浓度为1.25mg/L；

（二）外植体的选取与消毒：

1）外植体的选取：选取狗枣猕猴桃成熟植株上的离体叶片作为外植体；

2）外植体的消毒：将选取的叶片用清水冲洗1.5小时，在超净工作台上用70%酒精消毒30s，然后用无菌水冲洗3遍，用0.1%升汞水溶液消毒2次，每次4分钟，然后用无菌水冲洗4遍，取出用无菌滤纸吸干水分，备用；

（三）诱导培养：将消毒好的叶片周缘切掉，然后在叶片表面割成网格状或将叶片切成1厘米见方的小块横放在培养基中，在温度25℃，光照周期13小时/d，光照强度2200lux的无菌环境下培养25天左右，诱导萌发出初代幼芽或丛芽；

（四）继代及生根培养：将诱导出的初代幼芽或丛芽移植继代培养基中，在温度25℃，光照周期13小时/d，光照强度2200lux的无菌环境下培养28天分化形成15倍、芽长至5cm、已生根4cm的组培苗；

（五）组培苗移栽与驯化：将已生根的组培苗，在温室内开瓶炼苗2.5天后，洗净根部的培养基，用1000ppm的ABT生根粉药液蘸根30s后移栽至细河沙：蛭石：珍珠岩=1：1：1的基质中，浇足水，保持70%左右的湿度至组培苗成苗，待40天后，组培苗已经长出很多的毛细根系，长8cm左右，转移至营养钵中继续生长，等待出圃。