[发明专利]脂肪细胞/肝细胞共培养模型进行降脂药物快速筛选的模型及其应用

摘要

本发明属于细胞体外培养技术领域，分别建立了脂肪细胞(正常)/肝细胞共培养模型和脂肪细胞(炎症)/肝细胞共培养模型，应用于降脂药物的快速筛选。本发明提供的脂肪细胞与肝细胞共培养体系，是在Millicell双层培养系统中，肝细胞贴壁培养在上层培养室的半透膜上，脂肪细胞贴壁培养在下层培养室的底面上；该培养体系是在体外条件下模拟脂肪组织对肝脏脂质代谢的调控作用；并以药物对细胞因子、酶和受体的影响，应用于降脂药物的快速筛选。

主权项

脂肪细胞/肝细胞共培养模型进行降脂药物快速筛选的模型，其特征在于其包括正常脂肪细胞与肝细胞共培养细胞和炎症脂肪细胞与肝细胞共培养细胞，分别按如下步骤制得：A、正常脂肪细胞与肝细胞共培养细胞取前3代的大鼠前体脂肪细胞，用0.25％胰酶消化后，在Millicell双层培养室的下室中加入1mL密度为2×105个/ml的前体脂肪细胞，待其贴壁后换为含5μg/mL的胰岛素、200pmol/L的T3，33μmol/L的生物素及10％胎牛血清的DMEM培养基进行培养，每2‑3天进行一次换液，8天后将培养基换为含10％胎牛血清的DMEM培养基；再将1mL肝细胞以2×105个/ml的密度加入Millicell上层小室，将所用的培养基均换为含10％胎牛血清的DMEM培养基，置37℃，体积分数5％的CO2培养箱内培养，每2天更换一次新鲜的培养基；B、炎症脂肪细胞与肝细胞共培养细胞取前3代的大鼠前体脂肪细胞，用0.25％胰酶消化后，在Millicell双层培养室的下室中加入1mL密度为2×105个/ml的前体脂肪细胞，待其贴壁后换为含5μg/mL的胰岛素、200pmol/L的T3，33μmol/L的生物素及10％胎牛血清的DMEM培养基进行培养，每2‑3天进行一次换液，8天后将培养基换为含10％胎牛血清及10ng/mL脂多糖的DMEM培养基，培养24小时后再将1mL肝细胞以2×105个/ml的密度加入Millicell上层小室；将所用的培养基均换为含10％胎牛血清的DMEM培养基，置37℃，体积分数5％的CO2培养箱内培养，每2天更换一次新鲜的培养基；其中所述的Millicell双层培养室在上层利下层之间设置的半透膜的孔径为0.4μm。