[发明专利]脂肪细胞/肝细胞共培养模型进行降脂药物快速筛选的模型及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞体外培养技术领域，具体涉及一种脂肪细胞/肝细胞共培养模型进行降脂药物快速筛选的模型及其应用

背景技术

随着经济水平的发展，国民生活方式的改变，一系列脂代谢紊乱的疾病，如高脂血症、非酒精性脂肪肝、代谢综合征等疾病的发生率日趋上升。如2002年中国居民与健康状况调查结果显示我国血脂异常人数为1.6亿人，而2007年发布的《中国成人血脂异常防治指南》则显示中国血脂异常现患率迅速攀升至18.6％。而近几年脂肪肝的发病率也迅速上升，特别是在某些职业人群中(白领人士、出租车司机、职业经理人、个体业主、政府官员、高级知识分子等)脂肪肝的平均发病率为25％；肥胖人群与II型糖尿病患者中脂肪肝的发病率为50％；嗜酒和酗酒者脂肪肝的发病率为58％。日趋严峻的脂质代谢紊乱疾病发病情况提示，临床现用的降脂药物效果并不理想，因此开发降脂药物的任务迫在眉睫。

近年来越来越多的研究资料表明，肥胖是脂代谢紊乱疾病的独立危险因素，脂肪组织可能在其中发挥重要的作用。国内外大量研究结果表明脂肪组织不仅仅是能量储存器官，也是一个活跃的内分泌和旁分泌器官，能分泌多种脂肪细胞因子，如抵抗素、脂联素、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α等。这些细胞因子共同作用于各个系统与组织，对机体的结构功能有重要的调节作用，特别是在调节机体糖脂代谢、维持能量及心血管功能的稳定、免疫应答等方面发挥着重要作用。已有研究证实，血浆低脂联素水平与脂质代谢紊乱如高甘油二酯和低HDL-C有普遍相关性，提示脂联素可能参与调节脂蛋白水平及其组成。另一方面有研究提出肥胖是一种低度的炎症性疾病或炎症状态，巨噬细胞与脂肪细胞相互作用改变了脂肪细胞因子如抵抗素等的分泌，最终导致代谢综合征和动脉粥样硬化发生、发展。临床研究亦显示肥胖患者体内脂肪细胞增生肥大，脂肪组织内T细胞和巨噬细胞明显增加，它们通过影响抵抗素和脂联素的分泌，进而导致多种脂质代谢紊乱疾病。而肝脏作为体内最重要的代谢器官，在脂类的消化、吸收、分解、合成及运输等代谢过程中均起重要作用。如肝脏是合成胆固醇的主要器官，占全身总合成量的3/4以上，其同时也可将胆固醇转化为胆汁酸，这是胆固醇降解的最重要途径。另外肝脏还参与除脂蛋白乳糜微粒外所有脂蛋白的合成过程，而且肝脏不但是合成脂蛋白的唯一部位同时降解脂蛋白的主要场所。考虑到脂肪组织与肝脏在机体脂质代谢中的重要地位，脂肪组织对肝脏脂质代谢的间接调控作用已日益受到人们的关注。

目前调节脂质代谢紊乱药物体外评价模型主要以单细胞为主，如游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株/人正常肝细胞株非酒精性脂肪肝体外模型等；以及以酶学研究为基础的模型，如脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、烷基辅酶A、胆固醇转移酶(ACAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP)、抑制LDL氧化修饰等分子水平模型。上述体外模型并不能较为全面的模拟体内脂质代谢情况，作为药物筛选的评价手段有所缺陷。而调节脂质代谢紊乱药物的体内动物模型评价方法主要采用：如构建家兔高脂饮食诱发高血脂模型、大鼠高脂饮食诱发非酒精性脂肪肝模型等，动物模型虽然能够更为贴切的模拟脂质代谢异常的情况，但是周期长、花费大，不适合药物的前期发现阶段的快速评估研究。

发明内容：

发明目的

本发明提供一种能够快速筛选降脂药物的细胞模型。

技术方案

一种脂肪细胞/肝细胞共培养模型进行降脂药物快速筛选的模型，其特征在于其包括正常脂肪细胞与肝细胞共培养细胞和炎症脂肪细胞与肝细胞共培养细胞，上述两种模型分别按如下步骤制得：

A、正常脂肪细胞与肝细胞共培养细胞

取前3代的大鼠前体脂肪细胞，用0.25％胰酶消化后，在Millicell双层培养室的下室中加入1mL密度为2×10⁵个/ml的前体脂肪细胞，待其贴壁后换为含5μg/mL的胰岛素、200pmol/L的T3，33μmol/L的生物素及10％胎牛血清的DMEM培养基进行培养，每2-3天进行一次换液，8天后认为其已分化为大鼠脂肪细胞，将培养基换为含10％胎牛血清的DMEM培养基；再将1mL肝细胞以2×10⁵个/ml的密度加入Millicell上层小室，将所用的培养基均换为含10％胎牛血清的DMEM培养基，置37℃，体积分数5％的CO₂培养箱内培养，每2天更换一次新鲜的培养基；

B、炎症脂肪细胞与肝细胞共培养细胞