[发明专利]氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒、筛选鉴定及菌样分离方法

摘要

一种氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒、筛选鉴定及菌样分离方法，试剂盒包括菌株富集管；氨氧化鉴定管1、2、3；菌株保藏液；显色剂A、B；筛选鉴定方法是将待检测菌种经菌株富集管富集后接种到氨氧化鉴定管1、2、3培养，同时用菌株保藏液将富集菌液保存；氨氧化鉴定管经培养后加入显色剂A、B，根据显色状态判断菌株氨氧化能力，菌样分离方法是将培养菌样稀释涂布分离。本发明的优点是实现氨氧化细菌快速、高通量筛选鉴定的效果，实现菌种培养、鉴定、保藏一站式操作。

主权项

一种氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒，其特征在于：它是由菌株富集管、氨氧化鉴定管1‑3、菌株保藏液、显色剂A和显色剂B组成；其中:菌株富集管：菌株富集管中装有富集培养基，每升富集培养基所含成分如下：硫酸铵250‑780mg，葡萄糖0.8‑2.1g，磷酸二氢钾480‑890mg，磷酸氢二钠0.7‑1.5g，硫酸镁100‑200mg，氯化钙5‑50mg，碳酸氢钠20‑120mg，微量元素母液A 1ml，微量元素母液B 1ml，以上培养基用浓度5%的碳酸钠和HCl调pH至7.00‑8.50；富集培养基配制完成并调完pH后，将富集培养基分装到1.8ml螺口冻存管中，每支冻存管加入富集培养基0.8ml，分装完毕后，115℃灭菌20‑30min；氨氧化鉴定管1：氨氧化鉴定管1中装有氨氧化鉴定培养基（1），每升氨氧化鉴定培养基（1）所含成分如下：硫酸铵250‑780mg，葡萄糖0.1‑1.2g，磷酸二氢钾480‑890mg，磷酸氢二钠0.7‑1.5g，硫酸镁100‑200mg，氯化钙5‑50mg，碳酸氢钠20‑120mg，微量元素母液A 1ml，微量元素母液B 1ml，以上培养基用浓度5%的碳酸钠和HCl调pH至7.00‑8.50；氨氧化鉴定培养基（1）配制完成并调完pH后，将氨氧化鉴定培养基（1）分装到1.8ml螺口冻存管中，每支冻存管加入氨氧化鉴定培养基（1）0.8ml，分装完毕后115℃灭菌20‑30min；氨氧化鉴定管2：氨氧化鉴定管2中装有氨氧化鉴定培养基（2），每升氨氧化鉴定培养基（2）所含成分如下：硫酸铵250‑780mg，醋酸钠0.4‑1.2g，磷酸二氢钾480‑890mg，磷酸氢二钠0.7‑1.5g，硫酸镁100‑200mg，氯化钙5‑50mg，碳酸氢钠20‑120mg，微量元素母液A 1ml，微量元素母液B 1ml，以上氨氧化鉴定培养基（2）用浓度5%的碳酸钠和HCl调pH至7.00‑8.50；氨氧化鉴定培养基（2）配制完成并调完pH后，将氨氧化鉴定培养基（2）分装到1.8ml螺口冻存管中，每支冻存管加入氨氧化鉴定培养基（2）0.8ml，分装完毕后115℃灭菌20‑30min；氨氧化鉴定管3：氨氧化鉴定管3中装有氨氧化鉴定培养基（3），每升氨氧化鉴定 培养基（3）所含成分如下：硫酸铵250‑780mg，葡萄糖0‑50 mg，醋酸钠0‑50 mg，磷酸二氢钾480‑890mg，磷酸氢二钠0.7‑1.5g，硫酸镁100‑200mg，碳酸钙1‑5g，碳酸氢钠20‑120mg，微量元素母液A 1ml，微量元素母液B 1ml，以上氨氧化鉴定培养基（3）用浓度5%的碳酸钠和HCl调pH至7.00‑8.50；氨氧化鉴定培养基（3）配制完成并调完pH后，将氨氧化鉴定培养基（3）分装到1.8ml螺口冻存管中，每支冻存管加入氨氧化鉴定培养基（3）0.8ml，分装完毕后115℃灭菌20‑30min；菌株保藏液：菌株保藏液成分如下：甘油30‑50ml，去离子水50‑70ml；显色剂A：显色剂A成分如下：对氨基苯磺酸0.5‑0.8g，15%醋酸溶液100ml；显色剂B：显色剂B成分如下：α‑萘胺0.1‑0.3g，15%醋酸溶液100ml；其中：每升微量元素母液A所含成分如下：硫酸亚铁5g，EDTA二钠5g；其中：每升微量元素母液B所含成分如下：EDTA二钠1.5g，ZnSO4.7H2O 430mg，CoCl2.6H2O 240mg，MnCl2 629mg，CuSO4.5H2O 250mg，Na2MoO4.2H2O 220mg，NiCl2.6H2O 190 mg，H3BO3 14mg。