[发明专利]一种筛选高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株的方法

摘要

本发明公开了一种筛选高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株的方法。不同的糙皮侧耳菌株从保藏状态下取出，经活化培养后接种到经过改良的PDA-Bavendamm平板培养基和经过改良的PDA-RB平板培养基上进行初步筛选出变色反应强且反应时间快的菌株，然后其接种到棉花秸秆固体培养基上再进行筛选。依据木质素降解率和选择性指数的大小，复筛出高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株。本发明建立了一套科学的筛选方法体系，初筛操作简便，通过向普通变色培养基中添加适量的棉秸秆粉末，使筛选更具针对性，保证了筛选结果的准确性；棉秸秆固体培养基碳源单一，使得降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株对碳源的选择具有唯一性，保证复筛结果的精确性。

主权项

一种筛选高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧菌株的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：（1）将待筛选菌株母种分别斜面接种于PDA培养基上活化培养，然后将活化了的菌种接种于PDA培养基平板上,25℃±0.5℃下培养7d后备用；所述PDA培养基按如下组分配比：马铃薯提取液1000ml、葡萄糖20g、KH2PO43.0g、MgSO4·H2O1.5g、维生素B10.1g、琼脂15.0g；（2）将步骤1）培养的七日龄的菌株平板用打孔器打取经直径为3.5mm×3.5mm的菌块分别接种于PDA‑Bavendamm培养基平板和PDA‑RB培养基平板上，25℃±0.5℃条件下培养7d，每日观察变色圈的形成情况并记录变色时间及变色圈直径；所述PDA‑Bavendamm培养基是向步骤1）的PDA培养基中加入单独灭菌的鞣酸至终浓度为0.01g/100ml，再加入过60目分样筛、粒径小于0.25mm的棉秸秆干粉，所述棉秸秆干粉的加入量为每100mlPDA培养基加入0.1g；所述PDA‑RB培养基是向步骤1）的PDA培养基中加入单独灭菌的RB亮蓝至终浓度为625ug/mL，再加入过60目分样筛、粒径小于0.25mm的棉秸秆干粉，所述棉秸秆干粉的加入量为每100mlPDA培养基加入0.1g；（3）将步骤（2）中筛选出的在两种培养基上变色反应强且反应时间快的菌株接种到棉秸秆固体培养基上，在25℃±1℃条件下培养30d；所述棉秸秆固体培养基按如下组分配比：5g过60目分样筛、粒径小于0.25mm的棉秸秆干粉，20mL合成培养液，所述合成培养液的按体积比其配方为：酒石酸铵液:大量元素液:微量元素液:VB1液:水=15:15:3:16；其中，酒石酸铵溶液浓度为22.0g/L,大量元素液每升含20gKH2PO4、13.8gMgSO4·7H2O、1.0gCaCl2和0.6gNaCl，微量元素液每升含0.35gMnSO4·H2O、60mgFeSO4·7H2O、110mgCoCl2·6H2O、60mgZnSO4·7H2O、95mgCuSO4·5H2O、6mgAlK(SO4)2·12H2O、6mgH3BO3和6mgNa2MoO4·2H2O，VB1的质量分数为100mg/L；（4）将步骤（3）获得的培养后的基质，采用Van Soest法测定木质素降解率并计算选择性指数，以此为依据筛选出高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株。