[发明专利]一种筛选高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌降解利用秸秆资源和食用菌栽培技术领域，具体涉及高效降解秸秆木质素的食用菌菌株的筛选方法。

背景技术

农作物秸秆含有大量的有机质，氮磷钾和微量元素，是一项重要的生物资源。我国年生产秸秆近6亿吨，但由于其难以被降解利用，1/3的秸秆被露天焚烧。这不仅是对资源的巨大浪费，也造成了严重的环境污染和一系列社会问题。秸秆难以降解的主要原因是细胞壁中木质素与半纤维素以共价键形式结合，将纤维素分子包埋在其中，这形成了一道天然屏障，限制了消化酶对细胞壁及细胞内容物的分解功能。棉秸秆中的木质素的含量高达25%以上，极大地限制了棉秸秆的降解利用，也是棉秸秆同其他农作物秸秆相比更难以利用的主要原因。因此消除秸秆中的木质素天然屏障，可促进秸秆资源的有效利用。其中筛选高效的白腐菌降解木质素是重要努力方向之一。筛选高效降解秸秆木质素的白腐菌菌株的方法有多种，但普遍存在操作复杂、准确性差、成本昂贵等缺点，不宜用作大范围菌株的筛选。因此以棉秸秆为培养料，建立一套操作简单、成本低、准确性好的筛选方法体系，筛选高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株，对秸秆资源的开发利用具有重要意义。既可为秸秆生物降解提供一条有效途径，同时又可获得经济效益，减少环境污染。

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株的方法，解决秸秆资源因木质素的存在而难以开发利用的问题。

实现发明目的技术方案如下：

1、整个筛选体系分为初筛和复筛两步，包括以下具体步骤：

（1）将活化培养后的不同糙皮侧耳菌株接种到经过改良的PDA-Bavendamm平板培养基和经过改良的PDA-RB平板培养基上，在25℃±1℃条件下培养7d进行初步筛选，每日观察变色圈的形成情况并记录显色时间及显色圈直径；

（2）将步骤（1）中筛选出的在两种培养基上变色反应强且反应时间快的菌株接种到棉花秸秆固体培养基上，在25℃±1℃条件下培养30d；

（3）将步骤（2）获得的培养后的基质，采用Van Soest法测定木质素降解率并计算选择性指数，以此为依据筛选出高效降解棉秸秆木质素的糙皮侧耳菌株。

所述的经过改良的PDA-Bavendamm平板培养基为：在PDA培养基中加入单独灭菌的鞣酸至终浓度为0.01g/100ml，再按W/V为0.1%加入过60目分样筛、粒径小于0.25mm的棉秸秆干粉。

所述的经过改良的PDA-RB平板培养基为：在PDA培养基中加入单独灭菌的RB亮蓝至终浓度为625ug/mL，再加入过60目分样筛、粒径小于0.25mm的棉秸秆干粉，棉秸秆干粉的加入量为每100mlPDA培养基加入0.1g；

所述的棉花秸秆固体培养基为：5g过60目分样筛、粒径小于0.25mm的棉秸秆干粉，20mL合成培养液，合成培养液改为低氮无糖高无机盐培养液，配方如下（数值为体积比）：

酒石酸铵液:大量元素液:微量元素液:VB1液:水=15:15:3:16。其中，酒石酸铵(22.0g/L)为氮源,大量元素液每升含20gKH₂PO₄、13.8gMgSO₄·7H₂O、1.0gCaCl₂和0.6gNaCl，微量元素液每升含0.35gMnSO₄·H₂O、60mgFeSO₄·7H2O、110mgCoCl₂·6H₂O、60mgZnSO₄·7H₂O、95mgCuSO₄·5H₂O、6mgAlK(SO₄)₂·12H₂O、6mgH₃BO₃和6mgNa₂MoO₄·2H₂O，VB₁的质量分数为100mg/L。

马铃薯提取液按如下方法制备：马铃薯刮去粗皮，去芽眼，准确称取200g，切成碎块放锅中，加水1000ml加热煮沸，期间不断搅拌；待水沸后再煮20～25min，用双层纱布过滤，所得滤液即马铃薯提取液。

本发明与已有技术相比，其有益效果体现在：