[发明专利]一种CRM197蛋白的生产方法

摘要

本发明涉及一种CRM197蛋白的生产方法，属于生物医药制造领域，其过程包括种子液的制备CRM197发酵培养、离心去除菌体、发酵液预处理、Toyopearl DEAE‑650S离子交换进行捕获、Butyl sepharose 4B进行疏水纯化、超滤浓缩换液（冻干）；其中疏水纯化之后蛋白纯度不低于95％，由此确立了合理的发酵和纯化工艺路线以及相应的工艺参数，有利于工艺的放大和规模化生产。

主权项

一种CRM197蛋白的制备方法，包括如下步骤：1)采用白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)进行发酵培养；2)发酵液通过连续流或者杯式离心机离心后，过中空纤维进行进澄清处理；3)经过澄清之后的发酵液用10kDa超滤膜进行超滤浓缩；4)浓缩液经硫酸铵两次盐析后对沉淀进行复溶；5)复溶液经离子交换捕获CRM197蛋白；6)捕获后的蛋白经疏水分离进行进一步纯化；7)浓缩至所需浓度保存；其中，步骤4中的两次盐析过程为，超滤浓缩液采用20‑50％饱和硫酸铵进行第一次盐析，离心去除沉淀后用60‑85％饱和硫酸铵对上清液进行第二次盐析；其中，步骤5中的离子交换色谱为阴离子交换，阴离子色谱填料为：Toyopearl DEAE‑650S、DEAE.Fratogel EMD、Q.Sepharose.FF、CaptoQ Seharose.FF；其中，步骤6中的疏水纯化所用其疏水填料为：Toyopearl Phenyl‑650、Fractogel EMD Propyl S、Phenyl.Sepharose.6FF high sub、Butyl sepharose 4FF。