[发明专利]一种检测血小板微粒的方法

摘要

本发明公开了一种检测血小板微粒的方法，包括如下步骤：（1）血小板样品的制备；（2）定量分析血小板微粒的数量；（3）将连接在扫描离子电导显微镜的参比电极和探测电极放置在培养皿中；（4）绘制血小板表面形貌的三维拓扑结构图；（5）绘制加入激活剂60分钟后血小板表面形貌的三维拓扑结构图,并定性地观测血小板微粒的形成；（6）取加入激活剂的细胞培养皿中的上清液，定量分析血小板在激活后形成的血小板微粒的数量。本发明的方法排除了其它血细胞碎片和污染颗粒对血小板微粒（PMP）检测的影响，定性定量地检测了PMP，无需染色及任何特殊处理，节省了血小板特异性抗体用量，提高了PMP形成检测的准确性。

主权项

一种检测血小板微粒的方法，其特征是包括如下步骤：（1）血小板样品的制备取2毫升静脉血放入柠檬酸钠抗凝管中，离心后得到富血小板血浆；取200μL所述富血小板血浆放置于涂覆有200μL浓度为2mg/mL纤维蛋白原的35mm细胞培养皿中室温下孵育20‑30分钟，用PBS缓冲液洗脱未粘附在所述细胞培养皿底部的血小板后，加入1.5‑2mLPBS缓冲液后备用；（2）取200μL细胞培养皿中的上清液，利用流式细胞仪定量分析血小板微粒的数量；（3）将连接在扫描离子电导显微镜的Ag/AgCl参比电极放置在步骤（1）获得的细胞培养皿中；将连接在扫描离子电导显微镜的探测电极放置在步骤（1）获得的细胞培养皿中，所述探测电极是一设置在充灌有PBS缓冲液的纳米吸管内的Ag/AgCl电极；（4）用扫描离子电导显微镜监控流入探测电极电流的变化，通过负反馈控制使得跳跃的探测电极与血小板间保持设定的距离，记录下所述探测电极的位置，通过计算机绘制得到血小板表面形貌的三维拓扑结构图；（5）向细胞培养皿中加入激活剂，作用60分钟，通过计算机绘制得到加入所述激活剂60分钟后血小板表面形貌的三维拓扑结构图,并定性地观测血小板微粒的形成；（6）取200μL加入了激活剂的细胞培养皿中的上清液，利用流式细胞仪定量分析血小板在激活后形成的血小板微粒的数量。