[发明专利]一种山胡椒的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种山胡椒组织培养方法，以山胡椒幼嫩的腋芽作为外植体，建立一种通过组织培养的快速离体繁殖方法,所述的方法包括无菌材料的获得，不定芽的诱导分化和增殖，芽的生根和移栽等步骤；本发明对培养基进行了改良，添加了谷胺酰胺调节剂，大大提高了分化率，省略了组培中的无菌诱导生根环节，采用开放式操作，利用NAA诱导生根形成完整植株；本发明方法克服了山胡椒常规育种周期长、繁殖系数低等缺点，并提高了其性状的稳定性，可实现育苗的工厂化大批量生产，并有效解决山胡椒优质种苗的供应问题。

主权项

一种山胡椒组织培养方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：（1）无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的山胡椒幼嫩的腋芽，用自来水冲洗0.5～2h，然后在体积浓度为1%洗洁精的水溶液中振摇2～5mins，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75%乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡20～30mins，所述的混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液，再用无菌水冲洗3～5遍，将腋芽分切成0.5～2cm的节段，然后将节段接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述丛生芽诱导培养基为添加6‑BA1.0～4.0mg/L和NAA 0.1～0.5mg/L的MS基本培养基；（2）芽的分化和增殖：观察步骤（1）所述24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天后的节段，切口部位开始膨大，出现绿色突起，20～40天后出现不定芽，再培养10～20天后，当不定芽长到2～4cm时，将不定芽切下转接到芽增殖培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行增殖培养，获得丛生苗；所述芽增殖培养基为添加6‑BA 0.5～2.0mg/L、NAA0.05～0.2mg/L和谷氨酰胺80～120mg/L的MS基本培养基；（3）壮苗培养：将步骤（2）获得的丛生苗切割成单个，并转接到壮苗培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天，发育成3～5cm的分化苗；所述壮苗培养基为添加6‑BA 0.5～2mg/L和NAA0.1～0.3mg/L的MS基本培养基；（4）分化苗的生根：将经壮苗培养的分化苗从基部切下，将芽苗基部切口在30～50mg/L的NAA水溶液中浸泡20～40mins，然后直接扦插入已消毒的移栽基质中，再在移栽基质中施以1/4MS无机盐含量的培养基作为养分，扦插苗盖上薄膜，保持湿度90%以上，置通风阴凉处，在24～26℃、光照1500～2500lx条件下培养10～20天后长出3～6条细根，形成完整植株，最 终的生根率为90～95%；所述移栽基质为细沙、腐殖土与谷糠灰按质量比5：2：2的比例配置而成，所述移栽基质的消毒方法为：采用体积浓度0.5%福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再曝晒1～3天，完成对移栽基质的消毒。