[发明专利]一种山胡椒的组织培养方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，涉及一种山胡椒的组织培养和快速繁苗方法。通过这种方法，可以进行优良种苗规模生产。

（二）背景技术

山胡椒（Lindera glauca）属于樟科植物，落叶灌木或小乔木，又名毕澄茄、野胡椒、山鸡椒、山香椒、木姜子等。主要分布于山东、安徽、浙江、江西、福建、台湾、河南、湖南、广东、广西、四川、云南等地。山胡椒不但可用作园林点缀树种，配植于草坪、花坛和假山隙缝，而且山胡椒果实芳香，果及叶可提取芳香油，用作食品及化妆品香精，其种子含脂肪油，可制肥皂及机械润滑油。更重要的是山胡椒的根、枝、叶、果实可供药用，有祛风湿、消肿、解毒、止痛的功效，是我国卫生部公布的药食兼用植物材料。

近几年研究又发现，山胡椒果实挥发油中还含有大量的具有多种生物活性的单萜和倍半萜类芳香油，例如罗勒烯、α-及β蒎烯、樟烯、壬醛、癸醛和柠檬醛等。这些挥发油对常见的多种革兰氏阳性细菌、阴性细菌、新型隐球菌和白色念珠真菌均有抑菌作用。新的研究还发现山胡椒具有防癌、抗肿瘤等功效。因此，山胡椒除了作为新型的香料、食品保健品和食品保鲜剂以外，还被开发为新型的抑菌抗癌药物，受到越来越广泛的关注。

目前山胡椒的繁殖主要采用常规的种子繁殖和分株繁殖，繁殖时间长，繁殖系数低，无法满足日益高涨的生产和市场需求，许多山胡椒的优良品种资源得不到利用。生物技术的快速发展，特别是植物组织和细胞培养技术，为山胡椒的快速繁殖育种研究提供了重要基础。因此，发明一种快速高效的山胡椒繁殖方法是必然的需要。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种山胡椒的组织培养和离体快速繁殖的方法，使得在短期内可以获得大量的优质山胡椒种苗，满足市场的需要。

本发明采用的技术方案是：

一种山胡椒组织培养方法，所述方法按如下步骤进行：

（1）无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的山胡椒幼嫩的腋芽，用自来水冲洗0.5～2h，然后在体积浓度为1%洗洁精的水溶液中振摇2～5mins，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75%乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡20～30mins，再用无菌水冲洗3～5遍；将腋芽分切成0.5～2cm的节段，然后将节段接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液；所述丛生芽诱导培养基为添加6-BA 1.0～4.0mg/L和NAA 0.1～0.5mg/L的MS基本培养基；

（2）芽的分化和增殖：观察步骤（1）所述24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天后的节段，切口部位开始膨大，出现绿色突起，20～40天后出现不定芽，再培养10～20天，当不定芽长到2～4cm时，将不定芽切下转接到芽增殖培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行增殖培养，获得丛生苗；所述芽增殖培养基为添加6-BA0.5～2.0mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L和谷氨酰胺80～120mg/L的MS基本培养基；

（3）壮苗培养：将步骤（2）获得的丛生苗切割成单个，并转接到壮苗培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天，发育成3～5cm的分化苗；所述壮苗培养基为添加6-BA 0.5～2mg/L和NAA0.1～0.3mg/L的MS基本培养基；

（4）分化苗的生根：将经壮苗培养的分化苗从基部切下，将芽苗基部切口在30～50mg/L的NAA水溶液中浸泡20～40mins，然后直接扦插入已消毒的移栽基质中，再在移栽基质中施以1/4MS无机盐含量的培养基作为养分，扦插苗盖上薄膜，保持湿度90%以上，置通风阴凉处，在24～26℃、光照1500～2500lx条件下培养10～20天后长出3～6条细根，形成完整植株，最终的生根率为90～95%；所述移栽基质为细沙、腐殖土与谷糠灰按照质量比5：2：2的比例配置而成，所述移栽基质的消毒方法为：采用体积浓度0.5%福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再曝晒基质1～3天，完成对移栽基质的消毒，或者采用体积浓度0.5%福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再在烘箱中60℃下烘2天，完成对移栽基质的消毒。