[发明专利]一种改进的植物线虫永久玻片制作方法

摘要

一种改进的植物线虫永久玻片制作方法，属于植物线虫标本制作技术领域。包括以下步骤：1）线虫的杀死与固定，用固定液热杀死且同时固定线虫；2）线虫的脱水：在线虫的脱水过程中采用梯度脱水法，在对线虫脱水过程的各环节中，均在体视显微镜下操作；3）线虫永久玻片的制作：在制片过程中，用载玻片包装盒中的薄型纸做支撑物、采用无色透明指甲油封片。上述一种改进的植物线虫永久玻片制作方法，其操作过程和所需材料比常规线虫永久玻片制片方法简化了许多，降低了制作难度，提高了制片质量和成功率，为制作植物线虫永久玻片标本提供了一种操作简便、低成本、高效率的新方法。

主权项

一种改进的植物线虫永久玻片制作方法，其特征在于包括以下步骤：1）线虫的杀死与固定：将分离的新鲜线虫挑入盛有适量水的小皿内，将盛有固定液的试管置于盛有沸水的烧杯中水浴为3‑5min，在体视显微镜下用移液器小心吸出线虫小皿内的水层至皿底，取水浴中的固定液迅速加入小皿中，热杀死并固定线虫7‑9天；所述的固定液由体积比的以下物质组成：40%甲醛6‑10%、纯甘油1‑5%、蒸馏水85‑93%；2）线虫的脱水：在体视显微镜下用移液器小心移去固定液，在小皿内加适量脱水液Ⅰ，并将其敞口置于盛有酒精的密闭保鲜盒中39‑43℃过夜，在体视显微镜下小心吸去小皿内的脱水液Ⅰ，加入脱水液Ⅱ，用盖玻片盖住小皿口，置于加有纯甘油的密闭保鲜盒中39‑43℃下放置2‑4h；然后直接向小皿内加1‑2滴纯甘油，加盖玻片继续封盖小皿，并将小皿置于加有纯甘油的密闭保鲜盒中39‑43℃下过夜，去掉小皿上的盖玻片，将小皿再置于加有纯甘油的密闭保鲜盒中39‑43℃下放置4‑6h；小皿开口移动至密闭的干燥器内，室温下放置1‑1.5周后，其中的线虫标本即可用于制作永久玻片；所述的脱水液Ⅰ由体积比的以下物质组成：96%乙醇15‑24%、纯甘油0.5‑2.5%、蒸馏水75‑84%；所述的加入脱水液Ⅱ由体积比的以下物质组成：96%乙醇94‑96%、纯甘油4‑6%； 3）线虫永久玻片的制作：将一直径1‑2cm的干净打孔器I端部在酒精灯火焰上加热为8‑12s，趁热迅速插入到低熔点蜡盘中蘸取少量石蜡，在一干净载玻片中央轻按，即做成一蜡环；收集载玻片包装盒中的薄型纸，并用一直径略小于干净打孔器I的干净打孔器II打为圆形薄纸，根据标本目的线虫的大小，选择圆形薄纸张数，并用剪刀在其中心剪出一小的圆形孔后置于蜡环内部；在圆形孔内滴一小滴纯甘油；在体视显微镜下用挑针将已完全脱水的线虫移至上述纯甘油滴的中央，将其沉底且均匀排列；取一洁净的盖玻片，在酒精灯火焰上轻烤数秒后盖于蜡环上方；将此载玻片移至65‑70℃加热板上加热，直至石蜡融化；将载玻片移至实验台冷却，再用无色透明指甲油封片，贴上标签即可。