[发明专利]一种谷糠抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种谷糠抗肿瘤活性蛋白及其制备方法，以及该蛋白在制备抗肿瘤药物和保健食品中的应用。其制备方法是将纯天然谷糠粉碎，加入蛋白提取液低温过夜提取，随后加入预冷的丙酮低温沉淀蛋白，得到谷糠粗蛋白。在粗蛋白提取液中加入不同饱和度的硫酸铵粉末，分级沉淀蛋白，将硫酸铵沉淀的蛋白过Q阴离子交换层析柱，收集穿透液，再将其过SP阳离子交换层析柱，用0.1mol/L Tris-NaCl洗脱液洗脱，收集洗脱峰得到谷糠抗肿瘤活性纯蛋白(FMB)。该蛋白可明显抑制大肠癌细胞增殖和转移，可以在制备抗肿瘤药物和保健食品中应用。

主权项

一种谷糠抗肿瘤活性蛋白，其特征在于，通过包括如下步骤的方法制得：第一步：取谷糠，粉碎后，加入预冷的蛋白提取液，4℃下浸泡并搅拌12‑16小时，离心后取上清液，即为谷糠蛋白粗提液；所述的蛋白提取液为20mmol/L Tris‑HCl溶液，含0.85％NaCl，1mmol/L PMSF，pH8.0；所述的谷糠和蛋白提取液的重量体积比为1∶4‑6；第二步：在谷糠蛋白粗提液中加入2‑3倍体积的‑20℃预冷的丙酮，沉淀蛋白1‑2小时，离心，收集沉淀，在‑20℃下放置，使丙酮完全挥发，冷冻干燥，得到谷糠粗蛋白；第三步：将谷糠粗蛋白用pH8.0、20mmol/L Tris‑HCl缓冲液溶解，离心后取上清液，按0℃下硫酸铵溶液饱和度计算表，先加入30％饱和度的硫酸铵粉末，充分搅拌溶解后，静置，离心，收集上清液，再向上清液中加入85％饱和度的硫酸铵粉末，充分搅拌溶解后，静置，离心，收集沉淀，用pH8.0、20mmol/L Tris‑HCl缓冲液溶解、透析、浓缩即得到谷糠抗肿瘤粗蛋白；第四步：将抗肿瘤粗蛋白用pH8.0、20mmol/L Tris‑HCl缓冲液溶解，过Q阴离子交换层析柱，紫外检测仪于280nm波长处检测，收集穿透峰；第五步：将上述穿透液过SP‑阳离子柱交换层析柱，用含0.1mol/LNaCl的pH8.0、20mmol/LTris‑HCl缓冲液洗脱，紫外检测仪于280nm波长处检测，收集洗脱峰得到谷糠抗肿瘤活性蛋白。