[发明专利]一种犬狂犬病毒抗体的检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明旨在提供一种检测犬狂犬病毒抗体（IgG）的方法及检测试剂盒。该试剂盒由包被板和试剂反应体系两部分组成，包括狂犬病毒抗原包被反应板、标准品、阳性对照血清、阴性对照血清、洗液（20×）、样品稀释液、酶标结合物、显色剂A、显色剂B和终止液。其特征是采用酶联免疫法技术通过测定试剂盒的标准品，以此确定犬狂犬病毒抗体（IgG）含量达到保护水平所对应的吸光度，通过对待检样品吸光度与标准品吸光度进行比较，从而判读出待检样品中所含的狂犬病毒抗体(IgG)量是否达到免疫保护水平。本发明能同时对大量样品进行检测且检测结果与中和法实验的结果高度一致，具有很高的准确度，适用于免疫接种效果的监控、个体免疫状态的确定，可用于动物疫病的调查。

主权项

一种犬狂犬病毒抗体的检测方法，其特征在于包括下述步骤：（1）确定标准点：通过中和实验用标准品进行标定本方法的标准点，其抗体效价为0.5IU/mL；（2）编号：每次试验应在包被板上设空白对照孔1孔，标准孔3孔，阴性对照孔1孔，阳性对照孔1孔，其余为待检样品孔；（3）加样品稀释液：用加样器在包被板的标准空与待检样品孔加入样品稀释液，每孔100ul；空白对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔不加样品稀释液；（4）加样：分别于标准孔加入标准品10ul，各待检样品孔加入待检样品10ul，阴性对照孔加入阴性对照血清100ul，阳性对照孔加入阳性对照血清100ul；空白对照孔不加样；（5）温育（一）：充分混匀，贴上封板膜，37±2℃温育60分钟；（6）洗板（一）：洗板机洗或手洗5次；（7）加酶标结合物：除空白对照孔以外，各孔中加入酶标结合物100ul；（8）温育（二）：贴上封板膜，37±2℃温育30分钟；（9）洗板（二）：方法同洗板（一）；（10）加显色剂：每孔加入显色剂A 50ul，全部加完后再在每孔中加入显色剂B 50ul，混匀；（11）温育（三）：37±2℃显色10分钟，显色10分钟指从开始加显色剂B 到开始加终止液的间隔时间；（12）终止：显色完毕后立即于每孔加50ul终止液， 混匀；（13） 测定： 终止后应在10分钟内完成判读，对空白对照调零，用酶标仪在450nm波长处测定吸光值，或使用双波长测定吸光值，测定波长为450nm，参考波长可选630nm或655nm；（14）结果判定：若待测样品的OD值≥标准品OD值，结果判阳性且具备免疫保护水平；若待测样品的OD值＜标准品OD值，结果为样品不具备免疫保护水平，个体需进行进一步的免疫。