[发明专利]有缺陷的流感病毒颗粒

摘要

本发明涉及流感病毒和针对流感的疫苗接种领域。本发明提供了条件性缺陷的流感病毒颗粒，其具有7个不同的流感核酸片段。本发明还提供了条件性缺陷的流感病毒颗粒，其缺少选自基本编码酸性聚合酶(PA)、碱性聚合酶1(PB1)和碱性聚合酶2(PB2)的片段的流感核酸片段。更具体地，本发明提供了有缺陷的流感病毒颗粒，其具有7个不同的流感核酸片段，且缺少基本编码酸性聚合酶的流感核酸片段。另外，本发明提供了包含根据本发明的有缺陷的流感病毒颗粒的组合物在生产旨在生成使对象免受流感病毒感染的免疫保护的药物组合物中的应用，并提供了产生使对象免受流感病毒感染的免疫保护的方法，包括给需要的对象提供包含这样的有缺陷的流感病毒颗粒的组合物。

主权项

一种组合物，其包含条件性缺陷的病毒颗粒或包含细胞或源自所述细胞的物质，所述的病毒颗粒是选自如下组中任一项的病毒颗粒，所述的细胞包含选自如下组中任一项的病毒颗粒：(1)通过如下方法所获得的病毒颗粒：一种获得条件性缺陷的流感病毒颗粒的方法，其包括：第一步，用下述物质转染合适的第一细胞：通过在编码流感蛋白的核酸中进行内部删除而生成的一种或多种基因构建体，由此使所述的基因构建体不能生产功能性蛋白，但不阻碍将所述病毒的所述基因片段包装进病毒颗粒；和编码流感病毒的互补流感病毒核酸片段；和能在所述细胞中表达所述蛋白的一种或多种表达质粒；在感染后合适的时间点，从所述的第一细胞的上清液中收获至少一个病毒颗粒；第二步，用能在所述细胞中表达所述蛋白的一种或多种表达质粒转染合适的第二细胞；第三步，用包含从所述第一细胞得到的至少一个病毒颗粒的上清液转染所述第二细胞；第四步，在感染后合适的时间点，从所述的第二细胞的上清液中收获至少一个病毒颗粒，其中在所述方法中不使用辅助病毒；(2)通过如下方法所获得的病毒颗粒：一种获得条件性缺陷的流感病毒颗粒的方法，其包括：用下述物质转染合适的细胞：通过内部删除编码流感聚合酶的核酸而生成的一种或多种基因构建体，由此使所述的基因构建体不能生产功能性聚合酶，但不阻碍将所述病毒的所述基因片段包装进病毒颗粒；和编码流感病毒的互补流感病毒核酸片段；和能在所述细胞中表达所述聚合酶的一种或多种表达质粒；在感染后合适的时间点，从所述细胞的上清液中收获至少一个病毒颗粒，其中在所述方法中不使用辅助病毒；(3)通过如下方法所获得的病毒颗粒：一种获得条件性缺陷的流感病毒颗粒的方法，其包括：第一步，用能在所述细胞中表达流感聚合酶的一种或多种表达质粒转染合适的细胞；第二步，用如上述(2)中所定义的包含条件性缺陷的流感病毒颗粒的上清液感染所述细胞； 第三步，在感染后合适的时间点，从所述细胞的上清液中收获至少一个病毒颗粒，其中在所述方法中不使用辅助病毒；(4)通过如下方法所获得的病毒颗粒：一种获得条件性缺陷的流感病毒颗粒的方法，其包括：第一步，用下述物质转染合适的第一细胞：通过内部删除编码流感聚合酶的核酸而生成的一种或多种基因构建体，由此使所述的基因构建体不能生产功能性聚合酶，但不阻碍将所述病毒的所述基因片段包装进病毒颗粒；和编码流感病毒的互补流感病毒核酸片段；和能在所述细胞中表达所述聚合酶的一种或多种表达质粒；在转染后合适的时间点，从所述的第一细胞的上清液中收获至少一个病毒颗粒；第二步，用能在所述细胞中表达所述聚合酶的一种或多种表达质粒转染合适的第二细胞；第三步，用包含从所述第一细胞得到的至少一个病毒颗粒的上清液感染所述第二细胞；第四步，在感染后合适的时间点，从所述的第二细胞的上清液中收获至少一个病毒颗粒，其中在所述方法中不使用辅助病毒。(5)一种流感病毒颗粒，其包含一个或多个核酸片段，在所述片段中具有内部缺失，从而使得所述片段不能生成功能性的流感聚合酶，但不阻碍将所述病毒的所述基因片段包装进病毒颗粒，其中所述聚合酶选自酸性聚合酶(PA)、碱性聚合酶1(PB1)或碱性聚合酶2(PB2)。(6)一种流感病毒颗粒，其包含一个或多个核酸片段，在所述片段中具有内部缺失，从而使得所述片段不能生成功能性的流感聚合酶，但不阻碍将所述病毒的所述基因片段包装进病毒颗粒，其中所述聚合酶选自酸性聚合酶(PA)、碱性聚合酶1(PB1)或碱性聚合酶2(PB2)，并且其中所述内部缺失为如下：对于PA蛋白，从位于由非编码区计起的核苷酸58至207之间的5’‑核苷酸开始，至位于由非编码区计起的核苷酸27至194之间的3’‑核苷酸结束；对于PB1蛋白，从位于由非编码区计起的核苷酸43至246之间的5’‑核苷酸开始，至位于由非编码区计起的核苷酸24至197之间的3’‑核苷酸结束；对于PB2蛋白，从位于由非编码区计起的核苷酸34至234之间的5’‑核苷酸开始，至位于由非编码区计起的核苷酸27至209之间的3’‑核苷酸结束，上述的 核苷酸区间都不包括端点。