[发明专利]一种蛋白相互作用的检测方法

摘要

一种蛋白相互作用的检测方法，涉及一种蛋白的检测方法。将两个待测相互作用蛋白分别克隆到细菌双杂交载体上，再共转化至报告细菌。因为这两个目标蛋白的相互作用而启动报告基因的转录表达，产生特定的酶。采用荧光底物对共转化了两个目标蛋白的报告细菌进行染色，报告产物酶将荧光底物水解，释放出荧光素，通过流式细胞仪对单个细菌荧光强度的定量分析即可在单细菌水平检测两个目标蛋白的相互作用。单细菌水平蛋白-蛋白相互作用的定量检测及相关分析对于蛋白质功能的准确解析、信号转导通路的确定及新的药物靶点的发现具有重要意义。

主权项

一种蛋白相互作用的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)构建细菌双杂交载体：选择一对待确定相互作用的蛋白，将编码两个待测相互作用蛋白的核苷酸序列分别连接于相应的载体上，形成两个分别表达相互作用蛋白的细菌双杂交载体；2)将步骤1)中的表达两个相互作用蛋白的细菌双杂交载体共转化到报告细菌，形成包含两个相互作用蛋白的重组细胞；3)在适合表达两个相互作用蛋白的条件下，培养步骤2)中的重组细胞，表达目标产物，两个蛋白相互作用后促进报告基因的转录和表达；4)对于非跨膜荧光底物，加入荧光底物染色前需对重组细胞进行破膜处理，改变细胞的渗透性；对于可跨膜荧光底物，直接进行步骤5)的荧光染色步骤；5)在破膜后的重组细胞中加入荧光底物，其被报告基因的产物水解后，释放出荧光物质，通过流式细胞仪对单个细菌荧光强度进行定量分析，从而实现单细菌水平两个目标蛋白相互作用的检测。