[发明专利]一种蛋白相互作用的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白的检测方法，尤其是涉及一种结合流式细胞检测技术与细菌双杂交系统对单个细菌水平蛋白-蛋白相互作用进行快速检测的方法。

背景技术

蛋白质是生物体中各种生理功能的主要执行者，蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个重要组成部分，不仅可以从分子水平揭示蛋白质的功能，而且为我们更好地理解生命过程、疾病机制和新药开发等提供了一个很好的基础。蛋白质相互作用研究方法分为体外和体内检测两大类，其中体外检测主要包括免疫共沉淀、表面等离子共振分析、噬菌体展示、蛋白质芯片等([1]H.Guan，E.Kiss-Toth，Advanced technologies for studies on protein interactomes，Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.2008，110，1；[2]A.Droit，G.G.Poirier，J.M.Hunter，Experimental and bioinformatic approaches for interrogating protein-protein interactions to determine protein function，J.Mol.Endocrinol.2005，34，263)，这些方法均需要对细胞进行破碎以提取蛋白，对所研究蛋白的浓度和纯度有较高的要求，不仅操作繁琐且无法在天然状态下达成蛋白-蛋白相互作用。体内检测手段主要包括酵母双杂交、荧光共振能量转移、蛋白质片段互补技术等([1]H.Guan，E.Kiss-Toth，Advanced technologies for studies on protein interactomes，Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.2008，110，1)，这些技术在活细胞水平研究蛋白-蛋白相互作用，通过报告基因的表达产物可敏感地检测到蛋白质之间微弱的、瞬间的相互作用；更具特色的是所有操作均在核酸水平上进行，无需纯化蛋白。其中，最具代表性的酵母双杂交系统(Y2H)已被广泛地应用于发现新的蛋白质和蛋白质的新功能、研究抗原和抗体的相互作用、筛选药物作用位点以及考察药物对蛋白质之间相互作用的影响、绘制蛋白相互作用图谱和发现可以用来诊断和治疗的蛋白质标志物等领域([3]A.Bruckner，C.Polge，N.Lentze，D.Auerbach，U.Schlattner，Yeast two-hybrid，a powerful tool for systems biology，Int.J.Mol.Sci.2009，10，2763；[4]H.Yu，P.Braun，M.A.Yildirim，I.Lemmens，K.Venkatesan，et al.High-quality binary protein interaction map of the yeast interactome network，Science.2008，322，104；[5]I.Lemmens，S.Lievens，J.Tavernier，Strategies towards high-quality binary protein interactome maps，J.Proteomics.2010，73，1415；[6]B.Suter，S.Kittanakom，I.Stagljar，Two-hybrid technologies in proteomics research，Curr.Opin.Biotechnol.2008，19，316)。