[发明专利]一种基于混合酸消解的法医学硅藻检验方法

摘要

本发明公开了一种基于混合酸消解的法医学硅藻检验方法，包括光学显微镜检验和扫描电镜检验，其中光学显微镜检验至少包括以下步骤：（1）空白试验；（2）混合酸消解：在待检样品中加入浓硝酸、浓盐酸和过氧化氢溶液，以水浴加热方式消解；（3）离心沉淀；（4）涂片并以环氧树脂封闭；（5）硅藻定性定量分析；扫描电镜检验至少包括以下步骤：（1）空白试验；（2）混合酸消解：在待检样品中加入浓硝酸、浓盐酸和过氧化氢溶液，以水浴加热方式消解；（3）真空抽滤；（4）扫描电镜自动拍照并存储图像；（5）硅藻定性定量分析。本发明灵敏度高，高效、安全、环保、定性定量分析准确，在法医学溺死诊断实践中具有良好的应用前景。

主权项

一种基于混合酸消解的法医学硅藻检验方法，包括光学显微镜检验和扫描电镜检验，其特征在于包括以下步骤：所述光学显微镜检验包括如下步骤：（1）空白试验通过光学显微镜检验，确认所有试剂、工具和器皿不含硅藻；（2）混合酸消解于通风橱内，取待检验样品置一次性塑料试管内，依次加入浓硝酸、浓盐酸和过氧化氢溶液，静置后以水浴加热方式消解；（3）离心处理将消解液倒入离心管中，以重蒸水平衡，离心，用吸管吸去上清液，再加重蒸水平衡后离心，重复该步骤，直至上清液pH值为中性；（4）涂片吸去离心后的上清液，取沉淀物1‑2滴，均匀地涂布在载玻片上，烘干；换载玻片，重复该步骤，直至所有沉淀物涂片完毕；盖上盖玻片，以环氧树脂封闭，以备镜检；（5）镜检在光学显微镜下搜寻硅藻，记录所有涂片上的硅藻数及硅藻种类；所述扫描电镜检验包括如下步骤：（1）空白试验通过扫描电子显微镜检验，确认所有试剂、工具、器皿不含硅藻；（2）混合酸消解于通风橱内，取待检验样品置一次性塑料试管内，依次加入浓硝酸、浓盐酸和过氧化氢溶液，静置后以水浴加热方式消解；（3）真空抽滤采用单联或多联真空抽滤装置，对消解液进行真空抽滤，消解液抽滤完后加超纯水继续抽滤，使滤膜表面接近中性，最后加无水乙醇抽滤以去除滤膜中的水分；（4）扫描电镜自动拍照并存储图像在真空镀膜仪或离子溅射仪中将滤膜表面镀上金膜或铂膜，使其具有导电性，然后在扫描电镜一定放大倍数下，将滤膜含样品区域化分成若干个相同大小、紧密相邻的视场，对每个视场进行自动拍照并存储其图像；（5）硅藻定性定量分析采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对所拍摄视场图片中的硅藻进行检查、分类和统计处理。