[发明专利]一种丝素蛋白纳米纤维血管支架的制备方法

摘要

本发明公开了一种丝素蛋白纳米纤维血管支架的制备方法，先将未处理的蚕丝纤维经脱胶、透析后形成丝素蛋白海绵，然后在冰浴中滴加氯磺酸到吡啶中，将丝素蛋白海绵放入此溶液放中，经沉淀、溶解、透析脱盐后形成硫酸化丝素蛋白，最后将硫酸化丝素蛋白在机溶液中电纺形成丝素蛋白纳米纤维血管支架；本发明是通过丝素蛋白与氯磺酸反应所得，硫化后的丝素能延长血液凝固时间，并且随着硫酸基团的增加，抗血凝性也有了明显的提高，将硫酸化丝素蛋白进行静电纺丝制得，并且同时具备优良的生物相容性、生物降解性、良好的氧气/水得渗透性和卓越的力学性能，可以应用于小口径血管移植组织工程中，可实现大规模产业化。

主权项

一种丝素蛋白纳米纤维血管支架的制备方法，其特征在于：步骤如下：(1)蚕丝纤维预处理；将未处理的蚕丝纤维用0.05‑0.5％W/V碳酸钠溶液脱胶，溶解于氯化钙∶乙醇∶水，摩尔比例1∶1∶5‑1∶4∶10的混合溶液中，以60‑80℃连续搅拌，并随后用蒸馏水以截留分子量2000‑4000的透析管进行透析；最后，将丝素蛋白溶液冻干，12‑48小时后形成丝素蛋白海绵，保存在真空干燥器中备用。(2)硫酸化丝素蛋白的制备：在冰浴中缓慢滴加15‑50毫升氯磺酸到50‑100毫升吡啶中，将此溶液放入玻璃烧杯中并加入丝素蛋白海绵，逐渐加热反应体系到60‑100℃，在恒温冰浴中搅拌反应0.5‑5小时；反应后，加入50‑500毫升的蒸馏水，随后加入氢氧化钠溶液把反应液调至中性；不溶性部分用真空过滤除去，可溶性部分用500‑1000毫升的乙醇沉淀，离心收集沉淀并用少量水溶解；然后，用蒸馏水以截留分子量2000‑4000的透析管进行透析脱盐；在冷冻干燥后，硫酸化丝素蛋白保存在真空干燥箱中。(3)丝素蛋白纳米纤维血管支架的制备；硫酸化丝素蛋白溶解在5‑50％W/V有机溶液中；通过直径1‑3mm钢制的毛细针头在绝缘板上移动进行电纺；毛细管以固定的高电势和与基底平行的高度移动；毛细管与装有纺丝溶液的注射器相连；用注射器泵来保持恒定0.1‑1mL/h的体积流量；用5‑20千伏的高压将溶液纺成纤维和并在一个与针尖10‑20厘米的覆盖有铝箔盖的收集板上收集；然后，电纺纳米纤维支架均采用100％甲醇处理5‑20分钟，以促使β片层的构象转变，使其在水中不溶解。