[发明专利]豆基食品中叶黄素的含量检测方法

摘要

本发明涉及一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法。包括如下工作步骤：样品处理：准确称取样品1.0g，精确至0.0001g,置于50mL具塞聚丙烯离心管中,加入20mL45-50℃水，再加入0.1g淀粉酶，涡旋混匀，置50-60℃培养箱中培养30min,取出冰浴冷却至30℃以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取10min，然后，于5000r/min离心5min，准确移取10mL上清液于一15mL离心管中，30℃以下氮吹至干，用含0.1%BHT的丙酮溶液定溶至1mL，涡旋混匀，过0.2µm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；定量分析：定量分析包括标准曲线绘制和试液测定，最后用公式计算。在豆基食品中检测叶黄素的含量，具有方便、快捷、准确等优点。

主权项

一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法，其特征在于包括如下工作步骤：（1）试剂准备，所用试剂包括：（a）甲醇：色谱纯；（b）甲基叔丁基醚：色谱纯；（c）丙酮：色谱纯；（d）2,6‑二叔丁基对甲酚（BHT）:纯度≥99%；（e）二氯甲烷：色谱纯；（f）石油醚：分析纯；（g）淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg；（h）叶黄素标准品：纯度≥96.2%；（i）0.1%BHT的丙酮溶液：称取0.500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度；（j）标准储备液100µg/mL: 准确称取10mg叶黄素标准品，用二氯甲烷溶解并定容至100mL，于‑80℃冰箱中避光保存，保存期为3个月；（k）标准中间液20µg/mL：准确移取2mL标准储备液，用甲醇定容至10mL；（l）标准系列工作液：以含0.1%BHT的丙酮溶液将标准中间液分别稀释成0.4µg/mL、0.8µg/mL、1.6µg/mL、2.0µg/mL、2.5µg/mL；（m）水：超纯水；（2）仪器设备，仪器设备包括:（a）高效液相色谱仪：岛津 LC‑20AT泵，SPD‑20A紫外检测器； （b）电子天平：精确至0.0001 g；（c）超声波提取器；（d）涡旋混合器；（e）氮吹仪；（f）高速离心机；（3）样品处理：准确称取样品1.0g，精确至0.0001 g, 置于50mL具塞聚丙烯离心管中,加入20mL45‑50℃水，再加入0.1g淀粉酶，涡旋混匀，置50‑60℃培养箱中培养30min,取出冰浴冷却至30℃以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取10min，超声过程需更换冰块，保证整个提取过程温度不超过30℃，取出冷却至10℃以下，于5000r/min离心5min，准确移取10mL上清液于一15mL离心管中，30℃以下氮吹至干，用含0.1%BHT的丙酮溶液定溶至1mL，涡旋混匀，过0.2µm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；（4）色谱条件，色谱条件包括：（a）色谱柱：YMCTMCarotenoid（250 mm×4.6mm,5µm）或相当者；（b）进样量：20µL；（c）流速：1.0mL/min；（d）紫外检测器波长：445nm；（e）柱温：25℃；（f）流动相：85%甲醇‑15%甲基叔丁基醚；（5）定量分析：（a）标准曲线绘制：将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪，测定相应的峰面积，以峰面积为横坐标，标准工作液浓度为纵坐标绘制标准曲线；（b）试液测定：将制备好的样液注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，以标准曲线对样品进行定量，测得试液浓度；（c）计算，计算公式为： X=C×V1×100/(m×V2)，式中：X：试样中叶黄素的含量，单位为µg/100g；C：由标准曲线得到的试液浓度，单位为µg/mL；V1：加入石油醚的体积，单位为mL；V2：移取上清液的体积，单位为mL；m: 试样质量，单位为g。