[发明专利]豆基食品中叶黄素的含量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法。

背景技术

叶黄素是视网膜的主要色素成分，有过滤蓝光和抗氧化的作用，是匡助眼睛发育的重要营养素。由于光的照射，短光（蓝光）对视网膜的伤害很大。婴儿出身时的晶状体相对比较清彻，零-二岁段，约70-80%的蓝光可穿透晶状体到达视网膜。叶黄素为婴幼儿幼嫩的眼睛起到了屏障作用，于是有人把叶黄素比作“隐形的太阳镜”。由于人体自身并不能合成叶黄素，因此每天必须给宝宝补充一定量的叶黄素。

目前公司新推出的豆基产品中便添加了叶黄素，对于豆基食品中叶黄素的含量测定，国标中尚未有相应的检测方法。因此，开发豆基食品中叶黄素的含量检测方法对调配出最适于婴幼儿成长所需的含叶黄素豆基类食品有着重要意义。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法。旨在以方便、快捷、准确地检测豆基食品中叶黄素的含量。

本发明，其原理是：豆基食品中含淀粉，先经淀粉酶酶解后，利用石油醚进行提取，浓缩后用丙酮重溶，经紫外检测器测定，外标法定量。

本发明，包括如下工作步骤：

（1）试剂准备，所用试剂包括：

（a）甲醇：色谱纯；

（b）甲基叔丁基醚：色谱纯；

（c）丙酮：色谱纯；

（d）2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）:纯度≥99%；

（e）二氯甲烷：色谱纯；

（f）石油醚：分析纯；

（g）淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg；

（h）叶黄素标准品：纯度≥96.2%；

（i）0.1%BHT的丙酮溶液：称取0.500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度；

（j）标准储备液100μg/mL: 准确称取10mg叶黄素标准品，用二氯甲烷溶解并定容至100mL，于-80℃冰箱中避光保存，保存期为3个月；

（k）标准中间液20μg/mL：准确移取2mL标准储备液，用甲醇定容至10mL；

（l）标准系列工作液：以含0.1%BHT的丙酮溶液将标准中间液分别稀释成0.4μg/mL、0.8μg/mL、1.6μg/mL、2.0μg/mL、2.5μg/mL；

（m）水：超纯水；

（2）仪器设备，仪器设备包括:

（a）高效液相色谱仪：岛津 LC-20AT泵，SPD-20A紫外检测器； 

（b）电子天平：精确至0.0001 g；

（c）超声波提取器；

（d）涡旋混合器；

（e）氮吹仪；

（f）高速离心机；

（3）样品处理：准确称取样品1.0g，精确至0.0001 g, 置于50mL具塞聚丙烯离心管中,加入20mL45-50℃水，再加入0.1g淀粉酶，涡旋混匀，置50-60℃培养箱中培养30min,取出冰浴冷却至30℃以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取10min，超声过程需更换冰块，保证整个提取过程温度不超过30℃，取出冷却至10℃以下，于5000r/min离心5min，准确移取10mL上清液于一15mL离心管中，30℃以下氮吹至干，用含0.1%BHT的丙酮溶液定溶至1mL，涡旋混匀，过0.2μm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；

（4）色谱条件，色谱条件包括：

（a）色谱柱：YMC^TMCarotenoid（250 mm×4.6mm,5μm）或相当者；

（b）进样量：20μL；

（c）流速：1.0mL/min；

（d）紫外检测器波长：445nm；

（e）柱温：25℃；

（f）流动相：85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；

（5）定量分析：

（a）标准曲线绘制：将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪，测定相应的峰面积，以峰面积为横坐标，标准工作液浓度为纵坐标绘制标准曲线；

（b）试液测定：将制备好的样液注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，以标准曲线对样品进行定量，测得试液浓度；

（c）计算，计算公式为： X=C×V₁×100/(m×V₂)，式中：

X：试样中叶黄素的含量，单位为μg/100g；

C：由标准曲线得到的试液浓度，单位为μg/mL；

V₁：加入石油醚的体积，单位为mL；