[发明专利]一种检测雌激素受体与肽酸酯配体相互作用的方法

摘要

本发明涉及一种检测雌激素受体与肽酸酯配体相互作用的方法，包括将SPR的金属芯片进行特殊处理，再将从鲤鱼肝脏中提取的雌激素受体固定到经过特殊处理的金属芯片上，再进样不同浓度的肽酸酯溶液，得到受体-配体结合曲线。本发明受体与配体的结合特异性好，检出限低，可达10-17g/L，灵敏度为10-8ng/L，操作快捷简便，可用于研究低浓度下配体-受体的相互作用，具有良好的应用前景。

主权项

一种检测雌激素受体与肽酸酯配体相互作用的方法，包括：(1)将喂养于含肽酸酯的水中的鲤鱼杀死并取出肝脏，用KCl溶液洗去血液，吸干水分，加入与肝脏质量体积比为1g∶4～6ml的HEDG缓冲液匀浆，离心取上清，即得含有受体的细胞溶质；(2)使用SDS‑PAGE电泳对上述含有受体的细胞溶质进行分离分析，浓缩胶中使用80～90V电压，进入分离胶后使用120～130V电压；分离分析结束后将目的蛋白条切碎，装入1mL电洗脱液，置于电泳槽中以120～130V的电压洗脱，离心取上清，即为纯化后的受体蛋白溶液；(3)用超纯水冲洗金片，将金片放入硫酸/过氧化氢混合液中，静置，随后依次用超纯水、丙酮、超纯水、无水乙醇、超纯水冲洗金片表面，烘干；将金片置于10～15mmol/L的3‑巯基丙酸乙醇溶液中，40℃下孵育30～40min，取出金片用乙醇洗涤，再用超纯水冲洗、吹干；在金片上分别滴加150μl EDC/NHS混合液和150μl 200μg/L的链霉亲和素溶液，分别于室温静置、超纯水冲洗、吹干；(4)将经上述预处理的金片放到表面等离子共振仪上，通入PBS缓冲液，注入70μl受体，静置反应20min，再用PBS缓冲液冲洗至稳定，再依次进样不同浓度的肽酸酯溶液，得到雌激素受体‑肽酸酯配体结合曲线。