[发明专利]一种重组蛋白的制备方法及其应用无效
| 申请号： | 201110123520.8 | 申请日： | 2011-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN102277381A | 公开（公告）日： | 2011-12-14 |
| 发明（设计）人： | 惠觅宙 | 申请（专利权）人： | 杭州安瑞普生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/18;A61P19/02 |
| 代理公司： | 杭州赛科专利代理事务所 33230 | 代理人： | 陈辉 |
| 地址： | 310019 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种重组蛋白TNFR2-Fc-IL-1ra，其制备方法是：1、将TNFR2-Fc基因与IL-1ra基因重组成TNFR2-Fc-IL-1ra基因，并将构建到表达载体质粒，将构建好的含TNFR2-Fc-IL-1ra基因表达质粒经过线性化处理后，通过电转仪转染入CHO细胞中，经筛选获得单一稳定表达细胞株，将筛选获得的表达细胞株悬浮驯化培养；2、产物的分离纯化和鉴定：培养后的丰收液经过4750g/min，4℃离心10min，取上清，经过0.22μm过滤后，进行Mabselect亲和层析，收集洗脱峰进一步进行S-sepharose阳离子交换层析(SPSFF)，收集活性峰进行HPLC分析纯化产物的纯度，获得TNFR2-Fc-IL-1ra蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 蛋白 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种重组蛋白TNFR2 Fc IL 1ra，其制备方法是：1、将TNFR2 Fc基因与IL 1ra基因重组成TNFR2 Fc IL 1ra基因，并将构建到表达载体质粒，将构建好的含TNFR2 Fc IL 1ra基因表达质粒经过线性化处理后，通过电转仪转染入CHO细胞中，经筛选获得单一稳定表达细胞株，将筛选获得的表达细胞株悬浮驯化培养；2、产物的分离纯化和鉴定培养后的丰收液经过4750 g/min，4 ℃离心10 min，取上清，经过0.22 μm过滤后，进行Mabselect亲和层析，收集洗脱峰进一步进行S sepharose阳离子交换层析(SP SFF)，收集活性峰进行HPLC分析纯化产物的纯度，获得TNFR2 Fc IL 1ra蛋白。
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