[发明专利]一种利用RNAi技术培育抗条纹叶枯病水稻的方法

摘要

本发明涉及一种利用RNAi技术培育抗条纹叶枯病水稻的方法，适用于水稻防治水稻条纹叶枯病，属于生物和现代农业技术领域的应用技术。本发明通过构建含有水稻条纹叶枯病病毒CP和SP基因的RNAi表达载体，将植物表达载体利用农杆菌介导法分别转入优良玉米的胚性愈伤组织，通过G-418抗性基因筛选、分化、生根壮苗，获得再生转基因株系。该方法利用RNAi技术，可培育出优良的抗条纹叶枯病的水稻转基因株系，从根本上解决水稻条纹叶枯病问题，显著增强水稻抗性，提高其经济价值，为绿色农业提供有力的技术支持。

主权项

一种利用RNAi技术培育抗条纹叶枯病水稻的方法，其特征在于：   分别以下述两对引物F1/R1和F2/R2进行PCR扩增，从水稻基因中扩增得到CP和SP基因片段序列，CP和SP基因序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：F1: CGCTCGAGGTTCAGTCTAGTCATCTGCAC;R1: CGAGATCTTAGAATGGGTACCAACAAGCC; F2: CGCTCGAGAGAATCGAAGATGCAAGAGGTA;R2: CGAGATCTGCTATGTTTTGTGTAGAAGAGG;将得到的目的基因序列经不同限制性内切酶酶切形成粘性末端，再用与其相同的限制性内切酶酶切中间载体pUCCRNAi，于1.0％琼脂糖凝胶电泳分离后回收酶切的目的条带，连接克隆入pUCCRNAi载体中，形成含反向重复目的片段的中间载体pUCCRNAi‑CP2和pUCCRNAi‑SP2；用限制性内切酶分别酶切中间载体pUCCRNAi‑CP2和pUCCRNAi‑SP2，以及植物表达载体pCam23A，电泳回收目的条带后将含正反向重复序列的目的片段连接到pCam23A载体中，即为构建成功的植物表达载体pCam23A‑CP和pCam23A‑SP；将植物表达载体pCam23A‑CP和pCam23A‑SP，利用农杆菌介导法分别转入水稻的胚性愈伤组织，通过G‑418筛选、分化、生根壮苗，即获得再生转基因植株。