[发明专利]一种兔肝金属硫蛋白的提取方法

摘要

本发明涉及一种兔肝金属硫蛋白的提取方法。现有提取工艺中使用大量的乙醇和氯仿，成本高，污染环境，且氯仿对人的肝肾等器官有损害。本发明采用的技术方案依次包括下述步骤：①诱导：给成体肉兔注射硫酸锌，注射次数为为7次，剂量呈依次递增形式。②原料的破碎。③热处理：将研磨液迅速加热至78~80℃，保持5-10min，然后置冰水浴中快速冷却至0~4℃，冷冻离心分离。④酸调节pH沉淀杂蛋白：调上清液pH值，使其pH在4~5.5之间，温度在0~4之间，保持30分钟左右，冷冻离心分离后，调回pH至6.5-7.1之间。⑤超滤和透析袋浓缩。本发明提取工艺简单，成本低廉，特别可以减少有毒溶剂的使用。

主权项

一种兔肝金属硫蛋白的提取方法，其特征在于：其依次包括下述步骤①诱导： 采取隔日腹腔注射的方法给成体肉兔注射硫酸锌，注射次数为为7次，注射量范围10mg/kg‑250mg/kg硫酸锌，剂量呈依次递增形式，然后宰杀取肝脏，冰冻保存；原料的破碎：新鲜兔肝脏，生理盐水清理血迹后称重，加入2‑4倍量冰箱予冷的缓冲液，并在0~4℃下研磨，要求研磨液呈均匀状；③ 热处理：将研磨液迅速加热至78~80℃，保持5‑10min，然后置冰水浴中快速冷却至0~4℃，冷冻离心分离：④ 酸调节pH沉淀杂蛋白：调上清液PH值，使其PH在4~5.5之间，温度在0~4之间，保持30分钟左右，冷冻离心分离后，调回pH至6.5‑7.1之间；⑤ 超滤和透析袋浓缩：用0.22μ过滤器过滤，除去溶液中大分子蛋白质后，将溶液装入透析袋内，浸泡在蒸馏水中除去溶液的小分子，然后侵入聚乙二醇浓溶液中，浓缩至需要的体积。