[发明专利]测量G蛋白偶联受体激活

摘要

本发明涉及用于检测样品中的化合物的方法和多肽。特别地，本发明涉及一种无细胞组合物的用途，所述无细胞组合物包含至少一种包埋在脂双层中的G蛋白偶联受体，当在细胞中表达时，所述G蛋白偶联受体或其亚基的N端在细胞外而C端在细胞内，并且其能够结合所述化合物。任选地，所述组合物还包含至少一种辅助分子，其直接或间接结合所述G蛋白偶联受体的胞内环和/或C端。所述G蛋白偶联受体、和/或当存在时的辅助分子，组合包含生物发光蛋白和接纳体分子，这使得生物发光共振能量转移(BRET)能够用于检测结合所述受体的化合物。

主权项

一种检测化合物的方法，所述方法包括，i)用无细胞组合物接触样品，所述无细胞组合物包含a)至少一种G蛋白偶联受体，其包埋在脂双层中，并且其能够结合所述化合物，和b)任选存在的至少一种辅助分子，其直接或间接地结合所述G蛋白偶联受体的胞内环和/或C端，其中所述G蛋白偶联受体包含相同或不同的一个或多个亚基，并且其中所述G蛋白偶联受体、和/或当存在时的辅助分子，组合包含生物发光蛋白和接纳体分子，ii)与步骤i)同时或依次地提供所述生物发光蛋白的底物，并且允许所述生物发光蛋白修饰所述底物，iii)测定步骤ii)是否调节所述生物发光蛋白和所述接纳体分子之间的生物发光共振能量转移(BRET)，其中当所述化合物结合所述G蛋白偶联受体时，所述生物发光蛋白相对于所述接纳体分子的空间位置和/或偶极取向被改变，并且其中当在细胞中表达时，所述G蛋白偶联受体或其亚基的N端在所述细胞外而C端在所述细胞内。