[发明专利]一种病毒性疫苗大规模生产的纯化方法

摘要

本发明提供了病毒性疫苗大规模生产的纯化方法，利用疏水层析方法去除宿主细胞DNA和杂蛋白。疏水柱层析采用低吸附疏水层析介质进行纯化，主要是利用病毒在一定硫酸铵浓度下，充分暴露其疏水性，从而使其能够结合在层析柱上，而部分杂蛋白由于疏水性弱，残余宿主细胞DNA不具有疏水性，不能结合，所以流穿出来，这样就可以达到去除杂蛋白及宿主细胞DNA目的，其中杂蛋白去除率在90%以上，宿主细胞残余DNA含量达到500pg左右。本发明提供了一种创新性的病毒性疫苗纯化方法，该方法纯化效果好、重复性好、适宜于规模化疫苗制备。经疏水层析后宿主细胞残余DNA在500pg/ml左右，再辅以离子交换等纯化方法可以达到国家药典标准。

主权项

一种病毒性疫苗大规模生产的纯化方法，所述方法包括下面步骤：1）采用细胞培养技术收获的病毒抗原；2）取柱层析胶Phenyl Sepharose 6 Fast Flow(Low Sub)，按与水例为4：1，充分搅拌后装填于层析柱中；3）用0.1‑1.0M NaOH溶液，冲洗层析柱，至液体流出为PH8~14，保存1‑24小时；4）用注射用水冲洗层析柱至中性为止；5）用10‑40%硫酸铵，0.01‑0.05MPB缓冲液平衡层析柱1‑4个体积；6）将疫苗稀释成含10‑40%硫酸铵的浓度，与平衡液硫酸铵浓度一致，上样；7）上样后继续用平衡液冲洗至基线；8）用PB缓冲液、注射用水或0.01‑0.2MTris‑HCL洗脱收集疫苗抗原；9）收集的洗脱峰样品用凝胶层析或超滤除盐，并进行相应指标测定。