[发明专利]一种用于生态土壤系统基质DNA的提取方法

摘要

本发明属于土壤微生物学领域，具体涉及一种用于生态土壤系统基质DNA的提取方法。该方法是在细胞裂解前先对样品进行预处理，再将经过预处理后的土样中加入磷酸钠缓冲液和MT缓冲液，分离DNA。本发明通过土壤预处理，去除腐殖质，提高DNA产量，所提取的基质微生物DNA可直接应用于分子操作，具有简便，重复性好，准确可靠的特点。

主权项

一种用于生态土壤系统基质DNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）在细胞裂解前对样品进行预处理：称取土样，加入TE缓冲液，涡旋振荡1分钟，放入超声波常温水浴10分钟，上清液中再加TE缓冲液，摇匀，在4℃，10,000×rpm下离心5分钟，移去上清液；（2）经过预处理后的土样中加入磷酸钠缓冲液和MT缓冲液，置于FastPrep仪器上2分钟，速度5.5，冰上冷却后，在4℃，14,000×g下离心15分钟，上清液中加入PPS试剂，在4℃，14,000×g下离心5分钟，上清液中加入Binding Matrix 悬浮液，待蛋白质沉淀，移去上清液，混合物转移至SPINTM滤管中，在4℃，14,000×g下离心后，加入SEWS‑M，在4℃，14,000×g下离心，移去SPINTM滤管，放入试剂盒提供的试管中，室温干燥5分钟，加入DES和重悬的DNA洗脱液体，在4℃，14,000×g下离心后转移洗脱的DNA到试管中进行浓度分析，分离的DNA，贮存于‑20℃。