[发明专利]香雪兰查尔酮合酶的cDNA及DNA

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及从红花香雪兰花瓣中分离编码查尔酮合酶(CHS)的cDNA及DNA。香雪兰CHS基因(FhCHS)cDNA的核苷酸序列分析显示：FhCHS基因的cDNA序列全长为1240bp，其中开放阅读框长1170bp，其编码的蛋白序列长389个氨基酸，推测蛋白质的分子量是42,581Da，等电点为5.74。FhCHS DNA序列分析显示：FhCHS DNA序列长1369bp，序列中包含长为129bp的内含子，该内含子两端的剪切位点符合GT-AG法则。将所述的FhCHS cDNA在大肠杆菌细胞中表达重组的CHS蛋白，经SDS-PAGE蛋白电泳检测。为FhCHS基因的真核表达及功能鉴定提供了前提条件，这在转基因植物花卉的花色修饰和育性方面的研究具有极大的应用价值。

主权项

1.香雪兰查尔酮合酶的cDNA，其特征如下：其中(1)：香雪兰查尔酮合酶cDNA 3’端序列为GAGGCGTTCAAGCCGTTGGGGATCACCGATTATAACTCACTGTTCTGGATTGCGCACCCGGGAGGACCGGCAATACTTGACCAGGTCGAGGCGAAGATAGGACTGAAACCAGAGAAGCTGAGAGCTACTAGGCATGTTCTCAGCGAATATGGCAACATGTCGAGCGCCTGCGTGCTGTTCATTCTCGAAGAAATGAGGAAAAAGTCGGCGGAGGAGAAGAACGGTACGACCGGAGAAGGTCTAGAGTGGGGGGTGCTCTTCGGGTTCGGGCCGGGGCTCACGGTGGAGACAGTGGTGCTACACAGTGTTGAAGCTGTAGCACTACAGTTTGCTATCTTCTTCATACTCATTGAGGACTCCCTATATATCATTCCCATTACAATAACAGATTGGTGTTTCTCAAGTTTGGCTTTGGCCTGTATCTTATGTTTAAATAAACTTACTTACTAGTGCTCAATATACAGATGATCATCATTTCTTTCTTCTGATGGAGAAGAATTTGATGATGACAGACAATAATTTCTAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAACTC香雪兰查尔酮合酶cDNA 3’端序列长为553bp，下划线部分表示的是该序列的终止密码子，终止密码子以后的序列为3’端非编码序列(3’UTR)；其中(2)：RACE法获得香雪兰查尔酮合酶cDNA 5’端序列(SEQ ID NO.2)ACATGGGGATTCAAAACATAGCAATACCACTTAGCTAACTAAGAAGGAAACTCATCGCCAAAACTCTCTTTTGTTGCAAGAAAAGTGAATGTGGAGGAAATTCGCAAGGCACAGAGGGCGGAAGGCCCGGCCGCCATCTTGGCCATCGGCACCGCCACTCCCCCAAATGCCATCGAGCAGAGCGAGTATCCGGACTACTACTTTCGAGTCACCAACAGCGAGGATAAGGTCGAACTCAAGGAGAAGTTCAAGCGCATGTGCGAAAAGTCGATGATCAAGAAGAGGTACTTGTACCTAACCGAGGACATTCTCAAGGAAAATCCGAATGTCTGCGCGTACATGGCCACCTCCCTCGACGCCCGTCAGGACATGGTCGTCGTTGAGGTTCCGAAGCTCGGCAAAGAAGCTGCCACGAGAGCCATCAAGGAATGGGGGCAGCCCAAGTCGAAGATAACCCACCTTGTCTTCTGCACAACGAGCGGTGTCGACATGCCCGGGGCCGACTATCAGCTCACAAAACTCCTCGGTCTCCGTCCCTCGGTCAAGCGCCTCATGATGTACCAGCAGGGCTGCTTTGCGGGCGGCACCGTGCTCCGCCTAGCCAAGGACCTCGCGGAGAACAACCGCGGTGCTCGAGTCCTCGTCGTCTGTTCCGAGATCACTGCTGTCACCTTCCGTGGACCGTCAGAGTCTCATCTCGACAGTCTCGTAGGCCAGGCCTTGTTCGGTGATGGCGCTGCCGCACTCATCGTAGGTTCTGATGCTATCGAGGGAATCGAGAGACCGATCTTCGAGATGGTCTCCGCTGCGCAAACGATACTCCCCGATAGCGAAGGGGCGATCGACGGCCACCTTAGGGAAGTAGGCCTTACATTCCATCTGCTCAAGGATGTGCCCGGAATCATATCCAAGAACATCGAAAAGAGCCTCGAGGAGGCGTTCAAGCCGTTGGGGATCACCGATTATAACTCACTGTTCTGGATTGCGCACCCGGGAGGACCGGCAATACTTGACCAGGTCGAGGCGAAGATAGGACTGAAACCAGAGAAGCTGAGAGCTACTAGGCATGTTCTCAGCGAATATGGCAACATGTCGAGCGCCTGCGTGCTGTTCATTCTCGAAGAAATGAGGAAAAAGTCGGCGGAGGAGAAGAACGGTACGACCGGAG香雪兰查尔酮合酶cDNA 5’端序列长为1171bp，下划线部分表示的是该序列的起始密码子，起始密码子以前的序列为5’端非编码序列(5’UTR)；其中(3)：香雪兰查尔酮合酶全长cDNA序列(SEQ ID NO.3)GCAAGAAAAGTGAATGTGGAGGAAATTCGCAAGGCACAGAGGGCGGAAGGCCCGGCCGCCATCTTGGCCATCGGCACCGCCACTCCCCCAAATGCCATCGAGCAGAGCGAGTATCCGGACTACTACTTTCGAGTCACCAACAGCGAGGATAAGGTCGAACTCAAGGAGAAGTTCAAGCGCATGTGCGAAAAGTCGATGATCAAGAAGAGGTACTTGTACCTAACCGAGGACATTCTCAAGGAAAATCCGAATGTCTGCGCGTACATGGCCACCTCCCTCGACGCCCGTCAGGACATGGTCGTCGTTGAGGTTCCGAAGCTCGGCAAAGAAGCTGCCACGAGAGCCATCAAGGAATGGGGGCAGCCCAAGTCGAAGATAACCCACCTTGTCTTCTGCACAACGAGCGGTGTCGACATGCCCGGGGCCGACTATCAGCTCACAAAACTCCTCGGTCTCCGTCCCTCGGTCAAGCGCCTCATGATGTACCAGCAGGGCTGCTTTGCGGGCGGCACCGTGCTCCGCCTAGCCAAGGACCTCGCGGAGAACAACCGCGGTGCTCGAGTCCTCGTCGTCTGTTCCGAGATCACTGCTGTCACCTTCCGTGGACCGTCAGAGTCTCATCTCGACAGTCTCGTAGGCCAGGCCTTGTTCGGTGATGGCGCTGCCGCACTCATCGTAGGTTCTGATGCTATCGAGGGAATCGAGAGACCGATCTTCGAGATGGTCTCCGCTGCGCAAACGATACTCCCCGATAGCGAAGGGGCGATCGACGGTCACCTTAGGGAAGTAGGCCTTACATTCCATCTGCTCAAGGATGTGCCCGGAATCATATCCAAGAACATCGAAAAGAGCCTCGAGGAGGCGTTCAAGCCGTTGGGGATCACCGATTATAACTCACTGTTCTGGATTGCGCACCCGGGAGGACCGGCAATACTTGACCAGGTCGAGGCGAAGATAGGACTGAAACCAGAGAAGCTGAGAGCTACTAGGCATGTTCTCAGCGAATATGGCAACATGTCGAGCGCCTGCGTGCTGTTCATTCTCGAAGAAATGAGGAAAAAGTCGGCGGAGGAGAAGAACGGTACGACCGGAGAAGGTCTAGAGTGGGGGGTGCTCTTCGGGTTCGGGCCGGGGCTCACGGTGGAGACAGTGGTGCTACACAGTGTTGAAGCTGTAGCACTACAGTTTGCTATCTTCTTCATACTCATTGAGGACTCCCTATATATCATTCCCA香雪兰查尔酮合酶全长cDNA序列长为1240bp，开放阅读框架长1170bp，下划线部分表示的是该序列的起始密码子和终止密码子；其中(4)：由香雪兰查尔酮合酶全长cDNA序列推测得到的蛋白质序列(SEQ ID NO.4)MVNVEEIRKAQRAEGPAAILAIGTATPPNAIEQSEYPDYYFRVTNSEDKVELKEKFKRMCEKSMIKKRYLYLTEDILKENPNVCAYMATSLDARQDMVVVEVPKLGKEAATRAIKEWGQPKSKITHLVFCTTSGVDMPGADYQLTKLLGLRPSVKRLMMYQQGCFAGGTVLRLAKDLAENNRGARVLVVCSEITAVTFRGPSESHLDSLVGQALFGDGAAALIVGSDAIEGIERPIFEMVSAAQTILPDSEGAIDGHLREVGLTFHLLKDVPGIISKNIEKSLEEAFKPLGITDYNSLFWIAHPGGPAILDQVEAKIGLKPEKLRATRHVLSEYGNMSSACVLFILEEMRKKSAEEKNGTTGEGLEWGVLFGFGPGLTVETVVLHSVEA香雪兰查尔酮合酶全长cDNA编码的蛋白序列长389个氨基酸，推测蛋白质的分子量是42,581Da，等电点为5.74。