[发明专利]一种提取鱼类粘孢子虫基因组DNA方法

摘要

本发明公开了一种提取鱼类粘孢子虫基因组DNA方法。本发明提供的分离粘孢子虫孢子的方法，包括如下步骤：a)从感染粘孢子虫宿主中分离粘孢子虫孢子囊；b)用浓度为10g/l的PBS冲洗步骤a)得到的粘孢子虫孢子囊，得到粘孢子虫孢子溶液；c)将步骤b)得到的粘孢子虫孢子溶液离心、收集沉淀；d)向步骤c)得到的沉淀中加入浓度为10g/l的PBS和10g/l SDS，混合，离心，收集沉淀。本发明的实验证明，用本方法提取的基因组，基因组DNA的纯度高，不含有宿主的基因，而且提取量多。而且本方法可以用于鉴定粘孢子虫孢子。

主权项

一种提取粘孢子虫基因组DNA方法，包括如下步骤：1)将权利要求6‑9中任一所述方法得到的粘孢子虫孢子研磨成粉，加入提取液混匀，得到混合液；2)向步骤1)的混合液中加入氯仿异戊醇混合液混匀、离心，收集上清液；3)向步骤2)得到的上清液中加入氯仿异戊醇混合液混匀，离心，收集上清液；4)向步骤3)得到的上清液中加入异丙醇混匀，静置，收集沉淀；5)将步骤4)得到的沉淀依次进行漂洗、干燥、溶解、RNA消化，得到消化产物；6)将步骤5)得到的消化产物依次用酚氯仿异戊醇混合液和氯仿异戊醇混合液进行抽提，离心、收集上清液；7)向步骤6)得到的上清液中加入3MNaAc水溶液和无水乙醇混匀，静置，离心，收集沉淀，得到DNA。