[发明专利]亨廷顿病相关蛋白polyQ的体外聚集模型的建立方法

摘要

本发明为一种亨廷顿病相关蛋白polyQ的体外聚集模型的建立方法，包括如下步骤：构建GST-polyQ(Q36-Q55)融合蛋白表达载体；将该表达载体在表达菌中表达GST-polyQ(Q36-Q55)融合蛋白；将表达产物通过亲和层析纯化获得GST-polyQ(Q36-Q55)融合蛋白；将GST-polyQ(Q36-Q55)融合蛋白用蛋白酶酶切去除GST标签，获得polyQ多肽，冷冻干燥；制备polyQ多肽溶液；将polyQ多肽溶液在pH6.5-7.8的PBS中或Tris-HCl中进行聚集反应，使用Thioflavin T检测其聚集过程。本发明构建的模型可以用于抗亨廷顿病活性物质的筛选及动力学研究。与人工合成的polyQ多肽相比较，可大大降低其筛选成本。

主权项

一种亨廷顿病相关蛋白polyQ的体外聚集模型的建立方法，其特征在于包括如下顺序的步骤：(1)构建GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白表达载体：所述GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白是在polyQ多肽序列的N端加有GST标签，polyQ长度为Q36‑Q55，所述GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白表达载体是包含有编码GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白的核苷酸序列的表达载体；(2)所述GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白表达载体在表达菌BL21star中表达GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白；(3)将上一步所得表达产物通过亲和层析纯化获得GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白；(4)将GST‑polyQ(Q36‑Q55)融合蛋白用蛋白酶酶切去除GST标签，获得polyQ多肽，冷冻干燥；(5)制备polyQ多肽溶液：向polyQ多肽冻干粉中加入六氟异丙醇和三氟乙酸混合液，溶解polyQ多肽，然后用氮气吹干有机溶剂，再加入pH值为3的三氟乙酸或二甲基亚砜，使polyQ多肽重新溶解，获得polyQ多肽溶液；(6)将polyQ多肽溶液在pH6.5‑7.8的磷酸盐缓冲液中或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液中进行聚集反应，使用硫代黄素T检测其聚集过程。