[发明专利]一种从鹅血中分离免疫球蛋白IgY(ΔFc)的方法

摘要

本发明公开了一种从鹅血中分离免疫球蛋白IgY(ΔFc)的方法。具体步骤如下：1)制备脱脂血浆，取新鲜血液，离心，除去红细胞，进行脱脂，得脱脂血浆。2)辛酸沉淀，向血浆中加入辛酸达到一定浓度，沉淀去除杂蛋白，离心分离，取上清液。3)柱层析，用填充有混合模式吸附剂的层析柱分离上清液，收集洗脱峰。4)脱盐和干燥，将收集液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的免疫球蛋白IgY(ΔFc)。本发明所开发方法的特色在于设计了一条新的分离工艺，可以从鹅血中分离免疫球蛋白IgY(ΔFc)，方法的关键在于从辛酸沉淀的上清液中直接提取免疫球蛋白IgY(ΔFc)，具有操作步骤简单，分离纯化因子高的优点，可以推广应用于其它水禽血液的处理。

主权项

1.一种从鹅血中分离免疫球蛋白IgY(ΔFc)的方法，其特征在于包括如下步骤：1)配置0.1M的柠檬酸钠溶液作为抗凝剂，将新鲜鹅血与抗凝剂按照体积比为9∶1的比例混合均匀，用离心机以2500～3000rpm转速离心10～20分钟，得到血浆，4～8℃静置5～12小时，吸除上层聚集的脂肪，加入二氧化硅粉末进一步脱脂，二氧化硅粉末的加入量为300～1000mg/ml血浆，室温搅拌30～60分钟，过滤，得到脱脂血浆；2)将脱脂血浆与浓度为60mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4～5)按照体积比为1～4混合均匀，得到稀释血浆，加入辛酸，辛酸加入量为30～100μl/ml稀释血浆，4～8℃静置2～4小时，用离心机以8000-10000rpm转速离心20～30分钟，取上清液，得到免疫球蛋白IgY(ΔFc)粗品溶液；3)调节免疫球蛋白IgY(ΔFc)粗品溶液的pH至5～7，用0.45μm滤膜过滤后，上样到填充有混合模式吸附剂的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液，得到免疫球蛋白IgY(ΔFc)溶液；4)将免疫球蛋白IgY(ΔFc)溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度＞95％的免疫球蛋白IgY(ΔFc)固体产品。