[发明专利]干细胞分化为睾丸间质细胞模型的构建及应用

摘要

本发明提供一种构建胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞模型的方法，是将类固醇生成因子1和促黄体生成激素受体质粒共转染入ES细胞，然后用化合物或生长因子诱导ES细胞定向分化为睾丸间质细胞。本发明在细胞层面上对干细胞体外定向分化为睾丸间质细胞模型构建及其应用做了论证，对其中蕴藏的大量生物学信息进行初步探讨，所构建的细胞模型可为研究睾丸间质细胞分泌调节功能影响因素研究的替代模型；可用于以睾丸间质细胞为作用靶细胞的药物药效初步筛选与评价；可利用由干细胞分化而来的睾丸间质细胞移植作为一种新的补充睾酮的方法，提高睾丸间质细胞再生替代治疗的应用前景。

主权项

一种构建胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞模型的方法，主要是将类固醇生成因子1和促黄体生成激素受体质粒共转染入胚胎干细胞，然后用化合物或生长因子诱导胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞，通过以下步骤构建：将胚胎干细胞进行无饲养层培养，按有效转染试剂手册说明书进行质粒转染，6孔培养板中每孔4×105个ES细胞，并按以下试剂量操作：取两种待转质粒SF‑1和LHR各2μg溶于100μl EC缓冲液，再加入16μl增强子enhancer溶液，涡旋1s混匀，室温放置2‑5min；然后加入25μl有效转染溶液，涡旋10s，室温放置5‑10min；再加入2.2ml培养液混匀，转染24小时更换培养液后，加入诱导剂，5×10‑7mol/L维A酸和1×10‑3mol/L 8‑溴‑环磷腺苷共同诱导转染了SF‑1和LHR质粒的胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞，以检测睾丸间质细胞中类固醇合成相关蛋白：类固醇急性调节蛋白、血小板生长因子受体、胆固醇侧链裂解酶P450scc，和3β‑羟甾脱氢酶1是否表达和是否具有分泌睾酮功能为评价指标。