[发明专利]固定化植物乳杆菌生产γ-氨基丁酸的方法

摘要

本发明涉及固定化植物乳杆菌生产γ-氨基丁酸的方法，以来源广泛的海藻酸钠为固定化原料，选用的菌株为食品安全的植物乳杆菌，克服了一般固定化制备γ-氨基丁酸为有害的大肠杆菌。与固定化酶相比，节省了由于酶的分离提取和纯化而产生的大量成本。固定化细胞酶活力强，转化过程简单，转化液中无复杂成分，简化了GABA的分离纯化过程，对开发γ-氨基丁酸的工业化生产具有积极意义。

主权项

固定化植物乳杆菌生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：①将保存菌种接入到活化培养基，于30℃、160r/min振荡反应24h，再以2％的接种量接入种子培养基，30℃、160r/min振荡反应24h，离心收集菌体，置于4℃冷藏备用。②称取2g海藻酸钠，加入100ml去离子水加热煮沸溶解，静止2h以上，使海藻酸钠溶液中的气泡完全消失，备用。③用无菌生理盐水将菌体悬浮，按菌体湿重与生理盐水体积比例为1∶1(g/ml)制成菌悬液，加入到2％海藻酸钠溶液中至菌体终浓度为80g/L，充分混匀，然后逐滴滴入0.2mol/L的氯化钙溶液中，继续在氯化钙中浸泡2h，用于凝胶反应。然后过滤出海藻酸钙胶珠，用去离子水洗涤两次，4℃下保存备用。④称取5g固定化细胞，悬浮于30mL乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2M，pH 4.8)中，加入吐温-80 0.01g，再加入3g的L-Glu，在30℃，160r/min振荡反应24h，停止转化，氨基酸测定仪测定转化液中的γ-氨基丁酸含量⑤称取5g固定化细胞，悬浮于30mL乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2M，pH 4.8)中，加入吐温-80 0.01g，再加入3g的L-Glu，在30℃，160r/min振荡反应24h，停止转化，氨基酸测定仪测定转化液中的γ-氨基丁酸含量，过滤收集固定化细胞，去离子水洗涤两次，重新悬浮于30mL乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2M，pH 4.8)中，加入吐温-80 0.01g，再加入3g的L-Glu，在30℃，160r/min振荡反应24h后，再用氨基酸测定仪测定转化液中的γ-氨基丁酸含量，如此重复转化十次。