[发明专利]一种促进10-羟基喜树碱生物合成的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种促进10-羟基喜树碱生物合成的方法，本发明利用喜树植物的叶为外植体建立喜树细胞的悬浮培养系，首先添加硝酸钴、硝酸镧和水杨酸三种外源性物质对喜树细胞的次生代谢进行调控，然后，在细胞培养后期接种刺囊毛霉(Mucorspinosus)和黑曲霉(Aspergillus niger)两种微生物进行生物转化，将处理后的喜树细胞培养物放置于加有乙醇溶液的匀浆机中进行匀浆处理并滤过，得到含10-羟基喜树碱的滤液。本发明方法具有生产周期短、生产成本低、10-羟基喜树碱得率高的特点；该方法有利于喜树植物资源的保护。

主权项

一种促进10‑羟基喜树碱生物合成的方法，其特征在于该方法如下：(1)喜树植物的叶在含激素的MS培养基上诱导愈伤组织；(2)愈伤组织在含激素的MS培养基上继代培养以获得细胞培养系；(3)喜树细胞悬浮培养使用的液体培养基为含激素的MS培养基；(4)在喜树细胞悬浮培养液中加入硝酸钴2～200μMol/L、硝酸镧2～500μMol/L和水杨酸0.05～10mg/L；(5)在喜树细胞培养后期接种刺囊毛霉(Mucor spinosus)和黑曲霉(Aspergillus.niger)进行生物转化；(6)喜树细胞培养物与乙醇溶液进行匀浆处理并滤过，得到含有10‑羟基喜树碱的滤液；其中在步骤(1)、(2)、(3)中使用的激素为6‑苄基腺嘌呤和2，4‑二氯苯氧乙酸，它们联合使用，用量分别为0.1～2.5mg/L。