[发明专利]用于生成RNA病毒的新方法

摘要

本发明提供了一种在辅助病毒存在下使用线性表达构建物生成负链区段化RNA病毒的方法。

主权项

一种用于生成负链区段化RNA病毒的方法，包括下述步骤：a)提供不含任何扩增和/或选择序列的线性表达构建物，该构建物包含插入RNA聚合酶II(polII)启动子和聚腺苷酸化信号之间的RNA聚合酶I(polI)启动子和polI终止信号，该构建物进一步包含插入polI启动子和polI终止信号之间的HA和/或NA基因区段，b)用所述线性表达构建物转染宿主细胞，c)用具有辅助病毒HA和/或NA蛋白的辅助病毒感染所述宿主细胞，d)培养所述宿主细胞以扩增病毒颗粒，e)选择如下的病毒颗粒(i)含有自所述线性表达构建物衍生的HA和/或NA蛋白，但(ii)不含辅助病毒HA和NA蛋白或其区段，其中所述选择是基于HA和/或NA蛋白的表型、基因型或抗原性特性，且任选f)其中辅助病毒HA和NA蛋白的缺失是通过分析核酸或氨基酸序列来确定的。